临床医学1,25(OH)2D3抑制肝癌细胞HDAC2活性和促进p21 WAFICIP1(9)

贵阳医学院2014届硕士研究生论文

9 蒸馏水至 1000ml

11)TBST 缓冲液

20％Tween20 1.65ml

TBS 700ml

现用现配。

12)封闭液

脱脂奶粉 5g

TBST 100ml

现配现用

2、实验方法：

2.1细胞培养

2.1.1 细胞培养基:

肝癌细胞HpG2为贴壁细胞。用高糖DMEM 培养基含10%胎牛血清于5% CO 2、37℃

恒温培养箱培养。

2.1.2细胞传代

在细胞贴壁生长达80%～90%融合度时进行传代，首先弃旧培养液，用于37度温育的PBS 洗涤细胞1-2次（根据细胞培养液干净程度决定），加入1mL 0.25%胰蛋白酶液在显微镜下观察，观察细胞的胞质出现回缩，细胞之间的空隙逐渐增大后立即加入含10%胎牛血清的高糖的DMEM 培养基3ml 来终止胰蛋白酶液的消化。用枪头吸取瓶内的混合液，反复轻柔的把细胞从瓶壁上吹打下来。待细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液，分装入2个25 cm 2的培养瓶中，加培养液至每瓶6mL ，置于37℃，5% CO 2 培养箱中培养。

2.1.3细胞复苏

1）从液氮罐中取出有肝癌细胞HepG2细胞株的冻存管，立即投入37℃水中水浴，并不时轻轻摇动，使其尽快解冻。

（2）用75%的酒精棉花擦拭冻存管壁后，将其置于超净工作台上，打开管盖，用无菌玻璃吸管吸出细胞悬液转入15ml 灭菌离心管中，再向离心管中加入约8ml 细胞培养基，轻轻吹打悬浮细胞。

（3）1000r/min ，离心5min ，弃去上清。

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