贵阳医学院2014届硕士研究生论文
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[11,12]
，丁酸盐和曲古抑菌素A 通过抑制脱乙酰化和增强乙酰化而上调p21 WAFI ／CIP1
基因的转录[13-15]。这些研究结果说明：癌细胞中的p21 WAFI ／CIP1基因的表达受组蛋白乙酰化调控。 有研究报道1,25(OH)2D 3的抗肿瘤机制，但其确切分子机制至今仍未阐明；也有研究发现：1,25(OH)2D 3抑制肿瘤细胞生长的重要机制是1,25(OH)2D 3通过VDR 介导调节CDKI 及抑制CDK 复合物的活性，诱导多种类型的
细胞停留在细胞周期的G1期，发生G1期的阻滞，其中p21 WAFI ／CIP1
基因是调节细
胞周期的抑制蛋白CDKI ，大量研究已证实VDR 介导1,25(OH)2D 3通过上调p21和p27（周期素依赖性激酶抑制因子)来发挥生物学效应，抑制cyclin-CDK 复合物的活性及使Rb 蛋白去磷酸化，并使E2F 转录活性降低，最终肿瘤细胞停滞于G0/G1期，从而调节肿瘤细胞的增殖和分化[16]，Sari Toropainen 等研究发现1,25(OH)2D 3在下调人类MYC 基因时同循环辅助因子和组蛋白乙酰化有关，1,25(OH)2D 3通过VDR 介导与MYC 基因的VDRS 上的作用位点结合，VDRS 作用位点其中包括HDAC2、HDAC6、HDAC11[17]。据文献[17]数据得出1,25(OH)2D 3在下调MYC 基因时作用的位点时和核蛋白VDR 结合的有TBL1X 、SMRT 、HDAC6、HDAC11，在1,25(OH)2D 3两个小时的作用下，通过RT-PCR 和SiRNA 技术得出HDAC2在沉默前后的MYC 基因的表达从1.2下降到0.8，则得出HDAC2结合位点对1,25(OH)2D 3反应较敏感。
本课题设想1,25(OH)2D 3发挥生物学效应可通过上调周期素依赖性激酶抑制因子p21 WAFI ／CIP1，而p21 WAFI ／CIP1基因的表达受组蛋白乙酰化调控，本实验选用人肝癌细胞株，研究 1,25(OH)2D 3对人肝癌细胞株细胞中HDAC2的作用，观察 p21WAFI ／CIP1的表达情况，观察1,25(OH)2D 3在促进了p21 WAFI ／CIP1 的蛋白和mRNA 表达升高的同时，是否抑制HDAC2表达，探讨1,25(OH)2D 3是否通过抑制HDAC2表达来促进了p21 WAFI ／CIP1高表达，致使人肝癌细胞株停滞于GO/GI 期，从而调节肝癌细胞的增殖和分化。
材料与方法 1、实验材料 1.1主要仪器设备
eppendorf5331型PCR 仪 德国Eppendorf 公司
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