临床医学1,25(OH)2D3抑制肝癌细胞HDAC2活性和促进p21 WAFICIP1(12)

贵阳医学院2014届硕士研究生论文

（1）按下列比例建立HDAC2和p21 WAFI／CIP1模板合成体系：

成分（含量）体积（ul） RNA（约0.6µg/µl) 1.0–2.75 5³PrimeScriptTM Buffer 2.0 PrimeScriptTM RT Enzyme Mix I 0.5 Oligo dT Primer（50 μM）*1 0.5 Random 6 mers（100 μM）*1 0.5 加入RNase Free dH2O补足体积至 20 (2)反转录条件：37℃ 15 min

85℃ 5 sec

反应完后放4度

2.5 HDAC2和p21 WAFI／CIP1的PCR反应：

(1)HDAC2和p21 WAFI／CIP1的反应体系如下：

成分（含量）体积（ul）Premix Taq? 25

模板 0.5

引物 1（20 μM） 1.0

引物 2（20 μM） 1.0

灭菌蒸馏水 Up to 50 (2)按如下条件进行PCR反应：

? 940 5min

? 30 cycles:

94°C 1min

58°C 40sec

72°C 35sec

? 72°C 5min

TAE电泳缓冲液的配制：

1)配制1L的50³TAE电泳缓冲液：

12

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