临床医学1,25(OH)2D3抑制肝癌细胞HDAC2活性和促进p21 WAFICIP1(15)

贵阳医学院2014届硕士研究生论文

15 (6) 各孔分别加入200ulBCA 工作液，37℃放置30分钟。注: 也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟（BCA 法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深，且显色反应会因温度升高而加快。）。

(7) 测定A562，540-595nm 之间的波长也可接受。根据标准曲线，计算出样品的蛋白浓度。

2.10 SDS －PAGE 电泳

1、 安装制胶板

(1)用洗洁精清洗制胶玻板和胶槽，自来水冲洗至玻板至不再挂水珠再用去离子水冲洗3遍，最后室温晾干。

(2)在桌面上安装制胶装置，上锁扣时注意玻板底部平整对齐，并与海绵紧密接触（注意在安装过程中不要用手接触玻板中部，以免污染玻板）。

2、 制胶

(1)准备2个小烧杯，用洗洁精清洗后，依次用自来水、蒸馏水和去离子水冲洗。

(2)根据样品分离的要求，按表 4.1 配制分离胶，按表中的配方依次加入各溶液。注意丙烯酰胺溶液有神经毒性，取液时应该佩戴手套，取液前振荡试剂瓶。并观察试剂情况。

按下表配制 10% SDS-PAGE 分离胶所用溶液

配制不同体积和浓度凝胶所需要各成分的体积/ml

成分 10% 12%

去离子水（Deionized water ） 1.9 1.6

30%丙烯酰胺贮备液 1.7 2.0

1.5 mol/L Tris 溶液（pH 8.8） 1.3 1.3

10 %十二烷基硫酸钠（SDS ） 0.05 0.05 10% 过硫酸铵（APS ） 0.05 0.05 TEMED 0.002 0.002

(3)TEMED 最后加入，加入后立刻用 1 ml 的移液器吹打混匀溶液（并注意不要吹打出气泡）。

(4)将混匀的聚丙烯酰胺溶液沿胶板边缘快速注入胶板中，液面到预定位置后，换成ddH 2O 覆盖，室温放置 20-30 min 。

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