临床医学1,25(OH)2D3抑制肝癌细胞HDAC2活性和促进p21 WAFICIP1(7)

贵阳医学院2014届硕士研究生论文

胎牛血清 Hyclone公司，美国乙二胺四乙酸(EDTA) Sigma公司，美国Premix Taq? Takara公司，大连 L-谷氨酰胺 AMRESCO，美国

DMEM高糖培养基 Hyclone公司，美国1.3 引物合成

1.3.1引物合成由上海introvergen公司合成。内参序列如下：

人GAPDH 内参引物

Sense：5’ CGCTGAGTACGTCGTGGAGTC 3’

Antisense：5’ GCTGATGATCTTGAGGCTGTTGTC 3’

1.3.2 HDAC2的引物序列

Sense：5’ATTACTGATGCTTGGAGGAGGT 3’

Antisense：5’ TATTCTGGAGTGTTCTGGTTTG 3’

1.3.3 p21 WAFI／CIP1的引物序列

Sense：5’TGGAACTTCGACTTTGTCACCG 3’

Antisense：5’CCTGCCTCCTCCCAACTCATC 3’

1.4 细胞株

肝癌细胞株HepG2是来源于本实验室保存。含10%胎牛血清和DMEM高糖培养基于5%二氧化碳及37℃孵箱中培养。

1.5 SDS聚丙烯酰胺凝胶的配制

1） 30%丙烯酰胺溶液：

丙烯酰胺（Acrylamide） 29.0g

亚甲双丙烯酰胺（Bis-Acrylamide） 1.0g

用dddH2O定容至100ml的棕色瓶存于4℃。

2) 分离胶缓冲液 1.5mol/L Tris-Hcl ( PH 8.8）

Tris 18.15g

1mol/L HCL 调节PH

用dddH2O 定容至100mL，4℃保存

3) 浓缩胶缓冲液1.0mol/L Tris-Hcl (PH 6. 8）：

Tris 12.1g

1mol/L HCL 调节PH

7

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