临床微生物学检验4完整版(5)

研究）；③小培养法（又称微量培养法，是观察真菌结构及生长发育的有效方法，用于菌种鉴定），其又分为：玻片法、琼脂方块培养法、小型盖片直接培养法。

第八章

体外抗菌药物的敏感试验

㈠纸片扩散法（又称K-B法），被WHO推荐为定性药敏试验的基本方法。

①原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内测定菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感性，并且抑菌圈与该药物对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关。

②抗菌药物纸片。选择直径6.35mm，吸水量20μl专用药敏纸片，—20℃保存备用，每次未用完的药敏纸片放4℃保存。β‐内酰胺类抗生素纸片4℃保存不宜超过1周，否则效价会降低。

③培养基。CLSI水解酪蛋白（MH）琼脂为药敏试验的标准培养基，pH为

7.2~7.4，琼脂厚度4mm。

④细菌接种。接种物的准备可采用液体生长法或直接菌落悬液法。用0.5麦氏比浊标准管（1.5×10CFU／ml）校正菌液浓度，于15min内接种完毕。各纸片紧贴在琼脂表面，给纸片中心相距﹥24mm，纸片距平板內缘﹥15mm。

⑤结果解释和报告：接种正确时，细菌生长的平面是连续的而抑菌圈呈均匀的环状。测量抑菌圈直径，参照CLSI标准判断结果。分为三级： .敏感（表示测试菌可被测定药物常规剂量给药后所达到的血药浓度所抑制或杀灭）， .中介（指测试菌对常规剂量用药后体液或组织中的药物浓度的反应性低于敏感株，但在测定药物浓集部位的体液或高于正常给药量临床上使用有效。）， 耐药（指测试菌不能被在体内感染部位能达到的抗菌药物浓度所抑制）。

⑥（K-B法试验的）实验影响因素（简答题）

A.培养基质量。培养基的成分、pH、深度、硬度和湿度等对结果的准确性由直

接影响。

B.药敏纸片。药敏纸片的含药量是影响抑菌圈大小的重要因素，其次还有药敏纸片的保存方式。

C.接种菌量。接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，加大菌量使抑菌圈减小，相反可使抑菌圈扩大。

D.试验操作质量，接种后贴药片的时间，孵育条件和温度、时间，抑菌圈测量工具的精确度和质控菌株本身的药敏特性是否合格，有无变异等都是影响纸片法药敏结果的因素。

⑦质量控制。采用标准菌株是进行药敏试验质量控制的主要措施。常用的临床药敏质控标准菌株有：金黄色葡萄球菌ATCC25923，大肠杆菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853、粪肠球菌ATCC29212 或 33186等。标准菌株的抑菌圈应在CLSI允许的预期范围内，超出控制范围应检查原因并及时纠正。每次药敏试验应将标准菌株和待测菌在同一条件下做药敏试验。 8

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