临床微生物学检验4完整版(3)

③在抗生素应用前采集。感染可带来生命危险，临床医生会在细菌学检验出结果之前使用抗生素治疗，抗生素的使用将影响病原菌的检出。因此应尽可能在抗生素使用前留取标本。

④遵守无菌操作。在采取如脑脊液、血液或穿刺液等正常状态下的无菌部位标本，应严格注意无菌操作，不得被其他部位细菌污染。在有正常菌群寄居的部位，如口咽部、鼻咽部和泌尿生殖道等部位应采取措施避免正常菌群的和其他菌群的污染。盛放标本的容器应无菌。

⑤正确保存和运送。采集的标本均含有病原体或潜在的病原体，必须做好标本的正确保存和运送，容器应密封不易碎，标本不得污染容器的口和外壁。采集的标本应及时运送，远距离运送时，一般应冷藏（但对脑膜炎和淋病奈瑟菌，需保温35~37℃）。

2.细菌的生理生化特征检测（其中①②③为碳水化合物的代谢试验，④为蛋白质和氨基酸的代谢试验，⑤为碳源和氮源利用试验）

①氧化‐发酵试验（O‐F试验）。又称Hugh‐Leifson (HL)试验。必须在有氧环境中才能分解葡萄糖的是专性需氧菌；无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖的是兼性厌氧菌。细菌以分子氧作为电子受体分解葡萄糖的称为氧化型；细菌以无氧降解的方式分解葡萄糖的称为发酵型；不能分解葡萄糖的细菌称为产碱型。利用此试验可区分细菌的代谢类型。

用于细菌种属间的鉴别。肠杆菌科细菌为发酵型，非发酵菌通常为氧化型或产碱型。微球菌属可氧化葡萄糖，葡萄球菌属能发酵葡萄糖。

②甲基红（MR）试验。

原理：细菌在代谢过程中分解葡萄糖产生丙酮酸，某些细菌可进一步将丙酮酸分解为乳酸、乙酸、甲酸等，使培养基的pH下降至4.5以下，加入甲基红指示剂出现红色（阳性）。有些细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质，培养基的酸碱度维持在pH6.2以上，加入甲基红指示剂呈黄色（阴性）。 主要用于大肠埃希菌（阳性）和产气肠杆菌（阴性）的鉴别。沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，肠杆菌属、克雷伯菌属等为阴性。 ③V‐P试验。

原理：细菌在葡萄糖的代谢过程中生成丙酮酸，有些细菌可将丙酮酸进一步脱酸产生乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的氧氧化为二乙酰（丁二酮），进而与培养基中的精氨酸所含的胍基发生反应，生成红色化合物（VP反应阳性）。

VP试验常与与甲基红试验一起使用，两试验的结果阳性、阴性相反。即甲基红试验为阳性的细菌，在VP试验中则为阴性（如大肠埃希菌、沙门菌属、志贺菌属）；甲基红试验为阴性的细菌，在VP试验中则为阳性（沙雷菌属、阴沟肠杆菌）。

④吲哚试验。

原理：细菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚，与试剂中的对二甲氨基苯甲酸作用，形成红色的玫瑰吲哚。

主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。

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