4000rpm离心10min收集菌体，用Washing TE（50mmol/LTris-HCl
pH8.0,10mmol/LEDTA pH8.0）洗菌体2次。
将菌体充分悬浮在5ml 1×TE缓冲液中，先后加入0.5ml 5mg/L的蛋白酶、
0.5ml 10% SDS，轻轻混匀后50℃放置3h-5h。
用等体积的Tris饱和苯酚抽提2次，苯酚/氯仿/异戊醇抽提一次，氯仿抽
提一次。（取上清液。
乙醇沉淀DNA。
用自动移液器吸管头将絮状DNA沉淀块吸附到Ep管中，70%乙醇洗2次，干
燥后溶于适
当1×TE或ddH2O中。
3
细菌培养：细菌接种于5ml液体培养基中，37℃摇床（300rpm）培养过液。 细菌收集：取1ml培养物于1.5ml EP管中，室温8000rpm离心5min，弃上
清，沉淀重新悬浮于1ml TE（pH8.0）中（用ddH2O也行)。
菌体裂解：加入6μl 50mg/ml的溶菌酶，37℃作用2h。再加2mol/LNaCl50
μl，10%SDS 110μl，20mg/ml的蛋白酶K 3μl，50℃作用3h或37℃过夜。（此时菌液应为透明粘稠液体）。
抽提：菌液均分到两个1.5ml EP管，加等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶
1)，混匀，室温放置5-10min。12000rpm离心10min。抽提两次。（上清很粘稠，吸取时应小心，最好枪头尖应剪去）。
沉淀：加0.6倍体积的异丙醇，混匀，室温放置10min。1 2000rpm离心10。 洗涤：沉淀用75%的乙醇洗涤。
抽（凉）干后，溶于50μl ddH2O中，取2-5μl电泳。作PCR模板用。
5 CTAB/NaCl裂解法
接两环菌（0.75ml甘油管菌液）于25ml LB培养基中，37℃、200r/min培
养24h。
取1.5ml菌液于1.5ml Eppendorf 离心管中，8000r/min离心5分钟,弃去
上清。
加入1.5ml TE离心洗涤后,用567 ul TE溶解菌体,混匀。
加入30μl 10%SDS和3 ul 20 mg/ml的蛋白酶K（100 ug/ml），混匀，于
37℃温育1h。
加入100μl 5mol/L NaCl,充分混匀，再加入80μl CTAB/NaCl,混匀,65℃
温育10分钟。
加入等体积的氯仿/异戊醇(24:1)（0.8ml）,混匀,12000r/min离心5分钟,
保留上清。
上清中加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)(0.8ml),混
匀,12000r/min离心5分钟,保留上清。
加入0.6倍的异丙醇（0.48ml）,轻轻混合直到DNA沉淀下来
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