反向斑点杂交技术及其在基因诊断中的应用(3)

β地中海贫血(β地贫)是迄今已阐明其分子病理学的少数遗传病之一，因此也就成为最早用RDB进行基因诊断的对象[1]。β-地贫的分子基础主要是点突变，目前全球已发现100种以上的点突变，其突变类型的分布有着明显的种族和地域差异[5]，在我国人群中已发现了21种β-地贫突变。荣卡彬等[6]使用RDB方法对1004例疑似β-地贫病例进行基因诊断，结果有283例β-地中海贫血，共发现11种突变。其中CD41-42(40.89%)，IVS-2-654(22.68%)，CD17(12.71%)，TATAbox-28(14.43%)，CD43(3.78%)和CD26(1.72% )，占突变的95%以上。因此，反向斑点杂交法具有快速、准确的优点，适用于普通人群的β-地中海贫血分子检测和产前诊断。

RDB在耐药检测中有广阔的应用前景。在耐药检测中以耐多药结核病(MDR-TB )的研究最为深入。MDR-TB出现主要的耐药机制是细菌染色体的基因变异。目前发现的突变基因有

[7]：耐异烟肼(INH)的katG，inhA，ahpC，oxyR基因，耐利福平(REP)的rpoB基因，耐链霉素耐的rpsL, rrs基因，耐氟喹诺酮类(OFL)的gyrA ,gyrB基因；传统的药敏实验至少需要7-10日才能确定其耐药性。梁建琴等[8]设计与合成用于检测结核分支杆菌耐INH kaG和inhA基因的寡核苷酸探针，使用PCR-RDB方法检测临床分离株。实验发现：20株INH敏感株中，仅9株为野生型，余11株中，10株KaG基因315位密码子AGC-ACC, 1株AGC-AAC；15株为inhA野生型，另5株inhA基因-15位C-T突变。36株耐药株中，17株kaG野生型，18株AGC-ACC，1株与所试探针不杂交，PCR-DC显示KaG基因279位密码子GGC-GAC，11株inhA突变。kaG基因RDB突变检出率为50%,inhA基因突变检出率为30.56%。以传统药物敏感度试验结果为标准[9]，应用PCR-RDB检测结核分枝杆菌INH耐药基因，如表1。PCR-RDB的这些结果只用2日就可以完成。

研究者由此得出的结论：耐利福平的痰标本中，膜片检测与药敏结果的符合率为92.3%；非结核病的痰液标本中，检测灵敏度为91.7%，特异度为78.1%，阳性预测值61.1%,阴性预测值96.1%。

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