反向斑点杂交技术及其在基因诊断中的应用(2)

RDB的主要特点是将多种不同序列的ASO固定在同一膜条上，其技术关键是根据靶序列位点的碱基组成和结构特点，通过优化杂交条件，使整个检测结果达到最佳的杂交信号。尽管检测信号在各个杂交斑点上所显示的强度可能有些差别，但这不会影响阴阳性结果的判断

[1]。RDB杂交信号的检测一般采用非放射性物质。非放射性物质标记的方法有扩增片段的随机标记法[3]和PCR引物的5'端修饰法[1,2]，后者操作方便，被更多的研究者使用。

2 技术特点

反向斑点杂交具有以下特点：①将多种探针固定在同一膜上，同时参与检测的样本DNA又互不干扰，故能一次性筛查多个样本，每个样本又可筛查多种不同的位点；②方便快捷。膜条制备时间较短，并能大量预先制备放于4℃保存待用(至少可存放半年)；经过一次PCR扩增和一次反向杂交就可以完成对标本的检测，若采用快速导流型杂交仪，则整个杂交过程在 60min 即可完成。③非放射性标记引物，避免同位素的半衰期所带来的引物保存期短的问题，并使操作更安全。④充分利用PCR的高灵敏度和探针杂交的高特异性。国内有学者对HBV进行了基因分型，检测下限可达到103拷贝/ml，所有样本的RDB分型结果和测序分型结果完全一致[4]。

3 应 用

由于RDB具有方便快捷、高敏感度、高特异性等特点，目前已被用于基因突变检测，基因分型，病原体的检测等多个领域。国内外多个研究表明，RDB用于基因诊断领域具有很好的优势，并具有潜在的临床应用价值。

3.1 基因突变检测

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