布病检测标准(2)

稀释液) 振荡均匀后置37℃—38℃水浴20min 二单位溶血素 0.5 0.5 0.5 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ 0.5 0.5 ++ ++ 0.5 0.5 ++ ++ 0.5 0.5 ++ ++ + + + 0.5 0.5 ++ ++ — — — 0.5 0.5 ++ ++ — — — 0.5 0.5 ++ ++ — — — 0.5 0.5 ++ ++ — — — 0.5 0.5 ++ ++ — — — 0 0.5 ++ ++ 0.5 0.5 ++ ++ 0 0.5 ++ ++ 2.5%红细胞悬液 0.5 阳性血清加++ ++ 抗原 阳性血清不++ ++ 加抗原 结果 阴性血清加++ ++ 抗原 阴性血清不++ ++ 加抗原 振荡均匀后置37℃—38℃水浴20min +++ ++ +++ ++ +++ ++ C.3 原补体使用时应稀释倍数的计算

原补体使用时应稀释倍数按式（C1）计算： 补体稀释倍数

原补体稀释倍数= ×使用时每管加入量 （C1） 测得效价 20

以表C1为例，按公式计算 ×0.5=40倍。 0.25

即此例补体应作40倍稀释，每管加0.5Ml，即为一个补体单位。考虑补体性质不稳定，操作过程中效价会降低，正式试验时使用浓度比补体效价要大10%左右，本例补体工作单位作1：36稀释，每管使用0.5mL。

附 录 D

（规范性附录） 抗原效价测定

一般按照兽医制药厂产品说明书的效价使用。在初次使用或过久等其他原因需要测定时按下述步骤进行。

D.1 须取用两份阳性血清（分别为强阳性和弱阳性血清）和一份阴性血清来测定抗原效价。 D.2 阴性血清和阳性血清稀释

用稀释液对阴性对照血清仅作1：10稀释，阳性血清稀释成1：10、1：25、1：50、1：75和1：100，5个稀释度。 D.3 稀释抗原

用稀释液将抗原稀释成1：10、1：50、1：75、1：100、1：150、1：200、1：300、1：400和1：500等稀释度。

D.4 按表D1加入各种成份，并经37℃—38℃20min水浴2次。 表D1 布鲁氏菌补体结合抗原效价测定 ML 管号 1 2 50 3 75 4 5 6 7 300 8 400 9 500 对照 10 11 补体对照溶血素对照 抗稀释倍数加入10 原 量 100 150 200 0.5 0.5 各种血清稀释度加0.5 0.5 入量 工作量补体 二单位溶血素 2.5%红细胞 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 37℃—38℃水浴20min 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0 0 0.5 0.5 0.5 0 0 0 0.5 0.5 37℃—38℃水浴20min D.5 记录抗原测定结果

从水浴中取出反应管，观察溶血百分数，记录结果。 例举范例如表D2

表D2 布鲁氏菌补体结合抗原效价滴定结果（举例） 抗原稀释倍数 10 10 血清稀50 释倍数 75 100 25 100 100 100 100 100 50 0 0 10 50 80 75 0 0 0 20 50 100 0 0 0 0 20 150 0 0 0 0 10 200 0 0 0 0 20 300 0 0 0 20 80 400 0 0 10 30 80 500 0 0 20 80 100 D.6 抗原效价 抗原对阴性血清应完全溶血。对两份阳性血清各稀释度发生抑制溶血最强的抗原最高稀释度为抗原效价。

在正式试验时，抗原的稀释度应比测定的效价浓25%。以表D2为例，其效价为1：150，正式试验时按1：112.5稀释使用。 附 录 E

（规范性附录）

试管凝集试验参照比浊管的制备

每次试验须配比浊管，作为判定凝集反应程度的依据，先将20倍稀释抗原用等量稀释液作对倍稀释，然后按表E1配制比浊管。 表E1 参照比浊管的配制 管号 1 2 3 4 5 1：40稀释抗原液稀释液ml ml 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00 清亮度% 100 75 50 25 0 记录标记 ++++ +++ ++ + — 附 录 F （规范性附录）

溶血程度的标准比色管的配制

配制方法如表F1，牛、羊和猪补体结合反应判定标准均相同。

表F1 标准比色管的配制方法及反应判定标准 溶血溶液/% 0 10 0.25 0.45 1.80 20 30 40 50 60 70 80 90 100 溶血溶液1） 0 2.5%红细胞液 0.50 稀释液 判定符号 判定标准 2.00 阳性 0.50 0.75 0.40 0.35 1.60 1.40 +++ 1.00 1.25 0.30 0.25 1.20 1.00 +++ ++ 可疑 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 0.20 0.15 0.10 0.05 0 0.80 0.60 0.40 0.20 0 ++ ++ + + — 阴性 ++++ ++++ +++ 1）试验中全溶血的试管内液体即为溶血溶液

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