大青叶有效单体抗呼吸道合胞病毒作用的实验研究(3)

　
　　3.4  药物直接灭活病毒的作用和药物抗病毒吸附的作用按实验方法“2.4.2”和“2.4.3”项将药物与病毒混合后再作用与细胞,或者将药物与细胞作用后再感染病毒,逐日观察细胞病变。通过光镜观察，发现各提取部位不同浓度组均出现典型RSV感染所致的CPE，且与病毒对照孔无显著区别。通过测定各孔OD570并计算不同药物浓度时的病毒抑制率，也没有高于7%的抑制率和随药物浓度增加而病毒抑制率升高的趋势，说明各单体均不能直接杀灭RSV，也无阻断其吸附作用。

　　4  讨论

　　呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV) 是一种RNA病毒，属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)［3］。它是世界范围内婴幼儿下呼吸道感染, 特别是病毒性肺炎(约50%)和毛细支气管炎(约90%)的重要病原［4］。RSV每年易在冬春季引起暴发流行,持续约5个月，2岁内儿童为高发感染人群；在成人特别是老年人和免疫抑制的人群也有爆发流行，而目前FDA批准用于防治RSV感染的药物，仅有病毒唑（ribavirin），它应用中常出现白细胞减少，剂量过大时可致头痛、不可逆贫血、血清胆红素升高等副作用，动物实验有致畸的报道，在临床尤其是婴幼儿的应用受到限制。而RSV疫苗也存在安全有效性待测和价格昂贵等缺点。我们选用清热解毒中药大青叶，在实验中发现，大青叶单体对细胞毒性小，其无毒浓度在200 μg/ml以上，对RSV所致的细胞病变具有较好的抑制作用，在2～128 μg/ml这一段浓度范围内均呈现了较明显的量效关系, 说明当药物不足以结合所有的病毒时,剩余的病毒颗粒还会具有感染细胞并引发细胞病变的能力；当药物的量足够时,可以将绝大部分的病毒粒子结合从而避免细胞的感染。但当药物浓度大于128 μg/ml时，其对细胞的毒性作用则掩盖了其抗病毒作用。但其单体成分对细胞的毒性比病毒唑要大，说明还需要改进提取工艺，或修饰其结构，使其毒性降低。

　　抗病毒实验中3种不同的加药方式表明，它对病毒无直接杀灭作用，可能是由于中药成分温和，不含有能破坏病毒的包膜的有效成分或活性化合物；亦不能保护细胞免受病毒感染，可能由于它不能针对细胞表面的单一病毒受体的成分, 不能与细胞表面受体结合, 从而不能预防病毒的感染。但是它对已经进入胞内的呼吸道合胞病毒均有一定的抑制作用，能抑制病毒核酸复制或者阻止病毒蛋白合成，说明其可能干扰或抑制了病毒基因组的释放、复制或转录。其具体抗病毒机制值得从动物体内或者血清药理学、分子生物学等进一步深入研究。

【参考文献】
  　　［1］Suk Ran Kim, Chang-Seok Ki, Nam Yong Lee.Rapid detection and identification of 12 respiratory viruses using a dual priming oligonucleotide system-based multiplex PCR assay［J］. Journal of Virological Methods，2009, 156(1-2): 111.

　　［2］Zalilawati Mat Rashid, Elodie Lahaye, Diane Defer.Isolation of a sulphated polysaccharide from a recently discovered sponge species (Celtodoryx girardae) and determination of its anti-herpetic activity［J］.International Journal of Biological Macromolecules. 2009, 44(3): 286.

　　［3］N.D. Day, P.J. Branigan, C. Liu, et al. Contribution of cysteine residues in the extracellular domain of the F protein of human respiratory syncytial virus to its function［J］.BMC Virol. J. 2006,3: 34.

　　［4］Lauren R. Sorce RN, MSN, CCRN, CPNP-AC/PC, FCCM.Respiratory Syncytial Virus: From Primary Care to Critical Care［J］.Journal of Pediatric Health Care, 2009,23(2): 101.

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