阿米替林对缺血损伤神经元bcl2和bax表达的影响(3)

    3  讨论
    缺氧缺糖培养引起神经细胞损伤是体外模拟脑缺血的常用模型。本研究在缺乏葡萄糖的培养液中加入终浓度0.5 mmol·L-1的耗氧剂连二亚硫酸钠，培养24 h造成了细胞缺氧/缺糖损伤。结果显示，神经元“缺血”性损伤，细胞死亡率及LDH漏出均增高，细胞折光性下降,突起回缩。Ami 10-7、10-6、10-5mol·L-1能显著抑制神经元的这种损伤，这进一步证明Ami对缺血损伤的神经元具有保护作用。
    本实验显示，缺氧缺糖培养的神经细胞，LDH漏出率增加，NO生成增多，细胞存活率和GSH?Px下降，这表明在神经元缺氧/缺糖损伤过程中，产生大量氧自由基。Ami 10-7～10-5mol·L-1能不同程度地减少NO生成，降低LDH漏出率和细胞死亡率，提高GSH?Px活性，减轻“缺血”对神经细胞的氧化应激损伤，表现出较强的保护作用。
    缺血缺氧时，神经细胞发生能量代谢障碍，自由基产生增加，细胞膜完整性损伤，大量Ca2＋内流均能导致细胞死亡。研究表明［6，7］，脑缺血所致的神经细胞死亡有坏死和凋亡两种方式，迟发性神经细胞死亡以凋亡为主。脑缺血缺氧后有多种基因被诱导表达，有的促进凋亡，有的抑制凋亡，二者表达是否平衡，决定了细胞保护性因素和损伤性因素何者为主。bcl?2和bax基因是重要的调往调控基因。当bcl?2?bax或bcl?2?bcl?2形成蛋白二聚体时抑制凋亡，形成bax?bax蛋白二聚体则促进凋亡，因此bcl?2和bax表达的量致关重要。bcl?2表达增加可拆散bax?bax同源二聚体抑制凋亡，反之亦然。Ami 10-7～10-5mol·L-1能不同程度地增加bcl?2表达，减少bax表达，因此可以认为Ami对缺血损伤的神经细胞的保护作用的重要途径之一是通过调节凋亡调控基因的表达，改变bcl?2/bax的比例，减少细胞凋亡。

【参考文献】
  ［1］ Dildy J，Leslie SW. Ethanol inhibits NMDA?induced increase in free intracellular Ca2+ in dissociated brain cells［J］.Brain Res，1989，499：383?386.

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［3］ 孙东旭，张莉，陈学清. 体外细胞增殖和细胞毒试验.见：朱立平，陈学清主编.免疫学常用实验方法［M］.北京：人民军医出版社，2000：191?208.

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［5］ Keller JN，Kindy MS，Holtsberg FW，et al.Mitochondrial manganese superoxide dismutase prevents neural apoptosis and reduces ischemic brain injury:suppression of peroxynitrite production,lipid peroxidation, and mitochondrial dysfunction［J］. J Neurosci，1998，18(2)：687.

［6］ Shigeno T，Yamaski Y，Kato G，et al. Reduction of delayed neuronal death by inhibition protein synthesis［J］.Nourosci Lett，1990，120：117?119.

［7］ Nitatori T, Sato N, Waguri S,et al. Delayed neuronal death in the CA1 pyramidal cell layer of the gerbil hippocampus following transient ischemia is apoptosis［J］.J Neurosci，1995，15(2)：1001?1011.

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