抗酸染色镜检的操作规程
1.目的:通过抗酸染色鉴别结核杆菌.
2.原理:一般认为抗酸性菌体内含脂类物质较多,此物质具有抗酸的性质.染色时,它与石碳酸复红结合牢固,能抵抗酸性酒精的脱色作用,同时脂类又不易透过细胞膜,不能被脱色,因此抗酸菌能保持复红的颜色.相反,非抗酸性菌体内含脂类少,易被酸性酒精脱色,脱色时又易从细胞膜渗出而脱掉,最后被复染蓝色.
3.试剂:
3.1试剂来源:购买珠海贝索
3.2试剂盒组成:
R1:石碳酸复红溶液1χ100ml R2:酸性酒精溶液1χ100ml R3:亚甲基蓝溶液1χ100ml
4.质量控制:室内质控包括痰标本收集,痰片染色和镜检结果复查.痰涂片应保存供上一级参比实验室质量控制检查.
5.标本采集与处理:
5.1病人留标本前用清水漱口,用力咳出来自支气管深部的脓样或粘液样痰,量不少于3ml避免留唾液或鼻咽部分泌物.
5.2夜间痰为就诊前一天晚睡前咳出的痰液.
5.3初诊病人应送3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰),痰液不合格者重送.
5.4涂片:取脱脂过的干燥、清洁、无油污的新玻片，在玻片背面的左端1/3处以记号笔编号,用折断的竹签挑取痰标本的脓样,干酪样0.1ML,于玻片上均匀涂抹成2ⅹ2.5CM卵圆形痰膜,自然干燥后待检.
6.染色方法:
6.1用片夹夹住涂片火焰固定,加石碳酸复红溶液,徐徐加热至有蒸汽出现染5分钟,水洗.
6.2加脱色剂,不时摇动玻片至无色脱落为止,水洗.
6.3加复染液,染0.5-1分钟,水洗涂片后镜检.
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