HPLC操作规范

高效液相色谱操作流程 一. 开机前准备

1. 流动相准备

水相采用经纯水机处理后的超纯水，有机相（乙腈、甲醇、异丙醇等）采用HPLC级试剂。所有流动相在使用之前须经0.22μm滤膜（水相滤膜材料一般为醋酸纤维素,有机相滤膜材料一般为尼龙）过滤。过滤后的流动相再经过超声机除气泡5-10分钟后方可使用。

注：如需要配制水相有机相的混合溶液，应使用有机相滤膜。用错滤膜的后果：水相用有机相滤膜会造成过滤时液体过来吧不下去。有机相用水相滤膜会造成滤膜溶解。 2. 样品准备

所有需要测试的样品须经0.22μm滤膜过滤处理后方可进样，根据样品中的溶剂选择对应的滤膜。（水溶液采用水相滤膜，有机溶剂采用有机相滤膜）

二. 开机操作

1. 仪器、软件开机

依次打开检测器（SPD-20A）、柱温箱（CTO-10AS）、输液泵（LC-20AT）的power键，再打开电脑上的软件LCSolution工作站。 2. 排气操作

在建立检测方法、仪器参数之前，打开输液泵上的排液阀（逆时针旋转90度即可）后，按下输液泵仪器参数板上的purge按钮进行管路排气操作。Purge操作结束后将排液阀顺时针旋转到初始位置。

注：不能反复开关检测器，否则减少紫外灯使用寿命。

三.检测方法的建立

在进行purge操作的同时，可以在软件上设置仪器参数。具体步骤如下： 1) 打开软件菜单栏file下拉列表，点击new method file。在instrument parameters

view中找到advanced按钮并点击。依次设置Data Acquisition、LC time Prog（梯度程序用）、Pump、PDA、Column Oven、Controller中的参数。设置完成后，点击工具栏中的保存按钮保存设置的方法，再点击instrument parameters view中的download按钮下载仪器参数。完毕后打开工具栏中的instrument on按钮。

2) 待仪器稳定后（大约30mins），点击工具栏中的single start按钮，并设置进

样数据的保存路径和文件名，按ok键后再使用平头进样针进行手动进样。 3) 一次分析结束后，再点击single start进行下一样品检测。

4) 全部分析结束后，根据检测物质和所用流动相的性质重新设置流动相参数并

点击download按钮，进行系统的冲洗工作。

注：1.软件打开后仪器显示的参数是前一个使用者方法文件中的参数，千万不要直接在这个方法文件中进行参数的设置。如果之前已建立了方法文件，则无需建立新的方法文件，只要找到并打开之前已建立的方法文件即可。

2.pump的Max Pressure默认为10 Mpa，应设置到20 Mpa。

3.常用色谱柱冲洗步骤：先用20%有机相冲洗30mins，再用80%有机相冲洗30mins。

四．关机操作

冲洗结束后，点击工具栏中的instrument off按钮，依次关闭工作站软件，输液泵（LC-20AT）、检测器（SPD-20A）、柱温箱（CTO-10AS）的power键，即完成所有的关机操作。

测试结束后，切记完成仪器使用情况登记表的记录，收拾整理实验台后方可离开。

2013年9月12日

百度搜索“77cn”或“免费范文网”即可找到本站免费阅读全部范文。收藏本站方便下次阅读，免费范文网，提供经典小说教育文库HPLC操作规范在线全文阅读。