Ghrelin和Obestatin对大鼠空间学习记忆能力影响(2)

　　1.1 动物及分组
　　选用健康成年雄性Wistar大鼠48只，体质量为250～280 g，由青岛市药检所提供。置25 ℃室温下，昼夜循环光照，自由饮水。大鼠随机分为6组：对照组?1、Ghrelin低剂量组和高剂量组;对照组?2、Obestatin 低剂量组和高剂量组，每组8只。
　　1.2 双侧海马侧脑室埋管术
　　术前动物禁食15～20 h，采用80 g/L水合氯醛(400 mg/kg)腹腔注射麻醉，肛温维持在(37±1)℃。用耳杠将大鼠头部固定在立体定位仪上，使前后囟位于同一水平。充分暴露颅骨，以牙科钻于颅骨表面双侧海马CA3区(前囟后3.0 mm，正中线旁2.8 mm，埋管深度3.2 mm)和侧脑室(前囟后1.0 mm，正中线旁1.4 mm，埋管深度2.7 mm，参照Paxinos?Watson图谱，1998)钻透颅骨，注意切勿损伤大脑皮质，清除硬脑膜后将长14 mm、内径相当于7号针头的不锈钢外套管置入双侧海马CA3区。以502胶和牙托粉固定外套管，外套管内置入内芯，防止堵塞。术后腹腔注射青霉素10万单位一次。分笼饲养5 d，自由饮食进水。
　　1.3 给药方法
　　手术后第6天开始注药，动物在无束缚状态下给药。注药管内径为0.2 mm，CA3区注药深度为3.3 mm，注药时间为2 min，然后停针2 min。侧脑室注药深度为3.8 mm，注药时间2 min，然后停针2 min。对照组?1双侧海马微量注射无菌生理盐水各1 μL; Ghrelin 低剂量组大鼠双侧海马微量注射0.03 mmol/L的Ghrelin各1 μL;Ghrelin高剂量组双侧海马微量注射0.3 mmol/L的Ghrelin各1 μL。 Obestatin低剂量组侧脑室微量注射Obestatin为0.03 nmol(5 μL);Obestatin高剂量组侧脑室微量注射Obestatin为0.3 nmol (5 μL);对照组?2侧脑室微量注射无菌生理盐水各5 μL。每天注药一次，连续给药5 d。
　　1.4 Morris水迷宫实验
　　用于测量大鼠对水迷宫学习和记忆的能力。实验共历时5 d，测试前1 d让大鼠自由游泳2 min;第1～4天，每天上午10:00～12:00进行训练，以避免日节律差异。每天训练4次，每次训练90 s。训练时随机选择一个入水点，将大鼠面向池壁放入水中，观察并记录大鼠寻找并爬上平台的路程、所需时间(潜伏期)。4次训练大鼠分别从4个不同的入水点入水，如果大鼠在90 s内未找到平台，需将其引至平台，并使其在平台上停留30 s。这时潜伏期记为90 s，每次训练间隔30 s，统计4次的潜伏期的平均值。在第5天撤除水中平台，然后在原平台象限的对侧象限，将大鼠面向池壁放入水中，测其在90 s内在各象限的游泳时间、游泳距离及其占总时间、总距离的百分比。
　　1.5 统计学分析
　　应用SPSS 10.0及PPMS 1.5[10]统计学软件进行处理，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用方差分析。
　　2 结 果
　　2.1 Ghrelin的水迷宫实验
　　用药组与对照组大鼠每天双侧海马微量注射Ghrelin和生理盐水20 min后进行水迷宫隐匿平台训练，历时4 d。在训练过程中，大鼠寻找水中隐匿平台所需平均游泳时间和路程潜伏期见图1。从潜伏期变化可见，三组大鼠训练前2 d潜伏期迅速下降，从第3天开始趋于平稳，维持在一较平稳水平。前3 d三组之间时间和路程潜伏期比较，差异无统计学意义。第4天高剂量组的平均时间潜伏期为(9.12±0.93)s，明显低于对照组的(21.02±5.36)s(F=9.31,q=4.08，P<0.05)。高剂量组的游泳总距离为(176.31±15.33)cm，也明显低于对照组的(416.84±105)cm (F=10.18，q=3.98,P<0.05)。第5天撤除水下平台，高剂量组大鼠原平台象限游泳时间占总时间的百分比为(42.65±4.50)%，明显高于对照组的(28.65±3.27)%(F=9.02，q=9.02,P<0.05)。高剂量组大鼠原平台象限游泳距离占总距离的百分比为(38.94±4.39)%，高于对照组的(26.68±2.45)%(F=12.22，q=8.04，P<0.05)。
　　2.2 Obestatin的水迷宫实验
　　用药组与对照组大鼠均每天侧脑室微量注射Obestatin和生理盐水，20 min后进行水迷宫隐匿平台训练，历时4 d。在训练过程中，大鼠寻找水中隐匿平台所需平均游泳时间和路程潜伏期见图2。从潜伏期变化可见，三组大鼠训练前2 d潜伏期迅速下降，从第3天开始趋于平稳，维持在一较平稳水平。前4 d三组之间比较，差异无统计学意义。 第5天撤除水下平台，三组大鼠在各象限游泳时间及游泳距离占总时间、总距离的百分比各组之间也无统计学意义。

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