大孔树脂分离纯化杏香兔耳风总黄酮的工艺研究(2)

　　2.2.2 供试品总黄酮含量的测定取待测样品两份,减压浓缩至干,用甲醇溶解,按“标准曲线的制备”项下标准，测定样品的吸光度值，平行测3次, 取平均值, 然后用标准曲线方程计算样品中总黄酮的含量。

　　2.3 树脂的预处理[4]取上述市售新鲜的7种大孔树脂，分别用95%酒精浸泡数小时，用大量蒸馏水洗净。以湿法在搅拌下将树脂加入到层析柱中，等树脂沉降后再将水放出，用95%的乙醇3BV/h通过树脂层，至流出液加适量蒸馏水无白色浑浊现象，再用蒸馏水以同样的流速洗至中性，备用。所用树脂的型号及参数见表1。表1 吸附树脂的型号及物理参数

　　2.4 树脂的选择准确称取处理后的7种大孔树脂湿树脂各1 g于具塞磨口三角瓶中，加入杏香兔耳风样品液50 ml，25℃恒温振荡24 h，振荡频率140 r/min。过滤、保留滤液，用蒸馏水洗涤树脂，再将树脂浸泡在70%乙醇中，25℃恒温振荡24 h解吸，测定滤液即吸附上清液和解吸液中总黄酮的浓度。

　　2.5 静态吸附实验

　　2.5.1 吸附等温线的建立准确称取1 g AB-8湿树脂于具塞三角瓶中，加一定浓度的料液各50 ml,于18，25，32℃下静态吸附，每隔2 h取样0.5 ml，测定各个时段取样液中总黄酮浓度，绘制吸附等温线。

　　2.5.2 吸附动力学曲线的建立准确称取1 g AB-8湿树脂于具塞三角瓶中，加一定浓度的料液各50 ml,于25℃下静态吸附，每隔2 h取样0.5 ml，测定各个时段取样液中总黄酮浓度，绘制吸附等温线。

　　2.5.3 解吸条件优化[5]称取8g AB-8树脂于烧杯中，加入一定浓度的料液400 ml，静态吸附24 h,滤出树脂, 过滤后按质量平均分成8份, 分别置于8个锥形瓶中, 各加入10%, 30%,50%, 60%, 70%,80%,90%,100%的乙醇溶液, 静态解吸24 h。抽滤, 并用各自的洗脱剂冲洗树脂, 合并入滤液, 得到洗脱液, 测定各自的总黄酮含量, 并计算解吸量。

　　2.6 动态吸附实验

　　2.6.1 上样液浓度的考察称取AB-8型树脂50 g 4份,湿法装入4根2 cm×50 cm色谱柱中。选择4个浓度药液( 1.0,1.8,3,4.5 mg/ ml) ,加入量依次为450，250，150，100 ml ,以1.5 ml/min的上样速度、70%乙醇洗脱,洗脱液定容至450 ml，测定总黄酮含量后浓缩,烘干,并称重洗脱物。

　　2.6.2 上样液pH值选择称取AB-8型树脂50 g 4份,分别装入4根2 cm×50 cm色谱柱中, 分别加入4份1.8 mg/ml 的药液250 ml ,调pH值为4，5，6.2(原液)和8，分别以1.5 ml/min 的上样速度、70%乙醇洗脱,洗脱液定容至450 ml ,测定总黄酮含量后浓缩，烘干,称重洗脱物。选出上样液的pH值最佳为6.0。

　　3 结果

　　3.1 树脂对杏香兔耳风总黄酮的选择性本文研究了7种树脂对杏香兔耳风总黄酮的选择吸附性。计算公式如下：

　　吸附量=V(C0-C1)/M

　　吸附率=[(C0-C1)/C0]×100%

　　解吸量=C2×V/M

　　解吸率=[C2/(C0-C1)]×100%

　　式中C0为吸附前样液中黄酮浓度，C1为吸附后上清液中黄酮浓度，C2为解吸液中黄酮浓度，V为样液体积，M为湿树脂质量。结果见表2。表2 不同树脂对杏香兔耳风总黄酮的吸附和解吸能力从表2可以看出，AB-8大孔树脂对杏香兔耳风总黄酮的吸附和解吸能力都最大，所以筛选出AB-8作为本实验的研究。

　　3.2 吸附等温线根据静态吸附实验，24h树脂完全达到吸附平衡，根据下式计算出吸附量q。

　　q=V0(C0-C1)/M

　　式中，q为吸附量，mg/g为湿树脂;C0为初始黄酮溶液浓度mg/ml,C1为黄酮溶液的平衡浓度mg/ml，M为湿树脂的质量g。以吸附时间为横坐标，吸附量为纵坐标，绘制吸附等温线见图1。

　　图1 AB-8对杏香兔耳风总黄酮的吸附等温线

　　从图1可以看出，树脂在25℃时的吸附效果最好，温度过高或过低树脂的平衡吸附量均下降。这可能是由于高温时杏香兔耳风总黄酮的溶解性增加，导致树脂对其的吸附能力下降;低温时的杏香兔耳风总黄酮水溶性降低，容易析出而不易被树脂吸附。

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