1.5 统计学分析
采用方差分析，两两比较采用q检验(Newman?Keuls法)和Wilcoxon秩和检验。
2 结果
2.1 CD59蛋白表达
在同一稀释度条件下，pIRES?MCD59、pIRES?WTCD59和pIRES组CD59蛋白表达比较，差异有显著性（F=141.80～317.60，q=19.648～32.661，P<0.01）。见表1。
2.2 各组细胞中Caspase?3、 Bcl?2表达的比较
pIRES?WTCD59组与pIRES组比较，Caspase?3表达降低，Bcl?2表达增高，差异有显著意义（Z=3.462、3.958,P<0.05）；pIRES?MCD59组与pIRES组比较，Caspase?3表达降低，Bcl?2表达增高，差异有显著意义（Z=3.212、3.956,P<0.05）；而pIRES?WTCD59组与pIRES?MCD59组相比较，Caspase?3、Bcl?2表达差异无显著意义（Z=1.948、0.544,P>0.05）。见表2。
表1 不同稀释度CD59蛋白质表达（略）
与pIRES组比较，F=141.80～317.60，*q=19.648～32.661，P<0.01
表2 各组转染细胞Caspase?3、Bcl?2表达的比较（略）
3 讨论
关于CD59 与凋亡的关系，国外已有不少报道。HUGHES等[7]应用CD59抗体再灌注治疗免疫性血栓性微血管病可使肾小球内皮细胞凋亡增加3.5倍。KAWANO等[8]检测传染性单核细胞增多症病人T细胞表面的CD59抗原表达并分析CD59与活性诱导成熟T细胞凋亡的关系显示，CD59弱表达的CD8+T细胞比 CD59强表达的CD8+T更易凋亡。JONES等[9]研究显示，感染性疾病病人的多形核白细胞补体调节蛋白CD59和CD55的表达与细胞的凋亡有关。
光镜观察可见，凋亡细胞体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体，贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。本研究中观察到转染CD59的CHO细胞较未转染的CHO细胞或转染空质粒的CHO细胞凋亡细胞明显减少，细胞存活周期延长。
以Bcl?2为代表的凋亡抑制基因能抑制多种因素造成的细胞凋亡。Bcl?2是一个抑制凋亡的原癌基因,其编码的Bcl?2蛋白是一种与细胞器,特别是与线粒体膜关联的稳定蛋白，主要存在于线粒体外膜、核膜及内质网膜,通过抑制内源性核酸内切酶活性、阻止细胞色素 C、黄素蛋白AIF从线粒体释放入细胞质,使凋亡效应蛋白酶链Caspase?3不能激活以及抗氧化等机制发挥抗凋亡作用。本实验结果显示，Bcl?2在转染CD59的CHO细胞和只转染空pIRES质粒的CHO细胞中均可见表达，但在转染CD59的CHO细胞中表达显著增加,提示CD59可上调Bcl?2的表达。 Caspase 半胱氨酸蛋白水解酶家族是直接导致凋亡细胞解体的蛋白酶系统,在细胞凋亡机制网络中居中心地位。在Caspase家族中,Caspase?3处于蛋白酶级联反应的核心位置,在细胞凋亡信号传导过程中,被其上游蛋白酶切割激活后能直接参与切割细胞多种结构蛋白和功能蛋白,水解多种负责细胞生化和形态学改变的底物导致细胞以凋亡的形式解体。研究Caspase?3的表达可反映细胞凋亡程度。本研究中转染CD59的细胞Caspase?3表达明显下降，显示CD59对凋亡有一定的抑制作用。
本研究采用免疫组织化学染色方法检测转染CHO细胞表面所表达Caspase?3、Bcl?2的变化。结果显示，转染野生型和突变型CD59的CHO细胞Caspase?3表达明显下降，说明CD59具有抑制凋亡的作用；野生型CD59 与突变型CD59转染细胞 的Caspase?3表达差异无显著性，提示CD59 抑制凋亡信号转导与W40位点无关。Bcl?2在转染CD59的CHO细胞中表达显著增加，可能的机制是CD59促进抗凋亡信号的形成，从而抑制细胞凋亡活化信号的传导，减弱凋亡信号传导通路下游的级联反应，Caspase?3作为凋亡信号的执行者其表达减弱，提示CD59分子具有抗细胞凋亡的功能。本研究结果将为CD59在肿瘤逃逸中的作用提供理论依据。但是，CD59影响凋亡信号传导的具体途径还需要进一步的研究。
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