取5 µl质粒DNA，10 g/L TBE琼脂糖凝胶80 V、40 mA电泳检测DNA。设立marker对照。待溴酚蓝迁移至理想位置后，终止电泳，在紫外灯下观察拍照。
3.2.5 重组质粒pET-15b-fimA在E.coli BL21(DE3)pLysS内的诱导表达
在转化了质粒pET15b和pET-15b-fimA的LB固体培养基上，各挑取一单克隆菌落，分别接种入1 ml Amp+（50 μg/ml）的LB液体培养基中，37℃，250 r/min振摇过夜。用LB培养基1:100稀释过夜菌（50 μl:5 ml），37℃剧烈振荡培养2 h，待菌液浓度达A5500.6～0.8时，加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG），诱导的IPTG终浓度和诱导时间成梯度改变，以摸索最佳诱导条件：
A管：pET-15b-fimA，1 ml，加入IPTG致终浓度为2 mmol/L，30℃振摇3 h；
B管：pET-15b-fimA，1 ml，加入IPTG致终浓度为2 mmol/L，30℃振摇2 h；
C管：pET-15b-fimA，1 ml，加入IPTG致终浓度为2 mmol/L，30℃振摇1 h；
D管：pET-15b-fimA，1 ml，加入IPTG致终浓度为1 mmol/L，30℃振摇3 h；
E管：pET-15b-fimA，1 ml，加入IPTG致终浓度为1 mmol/L，30℃振摇2 h；
E管：pET-15b-fimA，1 ml，加入IPTG致终浓度为1 mmol/L，30℃振摇1 h；
F管：pET-15b，1 ml，加入IPTG致终浓度为2 mmol/L，30℃振摇3 h；
以上7个菌种管中菌液置于EP管中，4℃，12000 r/min离心5 min收集细菌沉淀，弃去上清；向沉淀中加入等体积的水和2×Loading buffer（SDS凝胶加样缓冲液），重悬后煮沸10 min，离心8 min；
取上清进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析。
SDS-PAGE：配制12％分离胶和5％浓缩胶，按Amersham Biosciences公司蛋白电泳系统说明书灌制凝胶。取上述样品，每孔30 μ1上样。电泳在恒压下进行，浓缩胶中为90 V，分离胶中为120 V。电泳结束后，凝胶右下角做切角标记，然后将凝胶放入表面皿，加入5倍体积的考马斯亮蓝染色液（考马斯亮蓝R250 1.0 g，甲醇450 ml，冰醋酸100 ml，蒸馏水450 ml），35℃摇床上染色3 h。染色完成后，加入脱色液（甲醇100 ml，冰醋酸100 ml，蒸馏水800 ml），35℃摇床上脱色至背景清晰，观察。
3.2.6 蛋白免疫印迹（Western blot）鉴定蛋白的表达
在转化了质粒pET15b和pET-15b-fimA的LB固体培养基上，各挑取一单克隆菌落，分别接种入1 ml Amp+（50 μg/ml）的LB液体培养基中，37℃，250 r/min振摇过夜。用LB培养基1:100稀释过夜菌（50 μl:5 ml），37℃剧烈振荡培养2 h，待菌液浓度达A5500.6～0.8时，加入IPTG：
A管：pET-15b-fimA，1 ml，加入IPTG致终浓度为2 mmol/L，30℃振摇3 h；
B管：pET-15b，1 ml，加入IPTG致终浓度为2 mmol/L，30℃振摇3 h；
以上2个菌种管中菌液置于EP管中，4℃，12000 r/min离心5 min收集细菌沉淀，弃去上清；向沉淀中加入等体积的水和2×Loading buffer，重悬后煮沸10 min，离心8 min。
取上清进行SDS-PAGE，电泳结束后将凝胶切取所需条带部分后进行Western blot，具体步骤如下：
1）用转膜缓冲液平衡凝胶和硝酸纤维素膜（NC膜）30 min。
2）铺膜：将海绵在转膜缓冲液中完全浸润铺于阴极板，上铺三层用转膜缓冲液浸湿的滤纸，铺凝胶，铺NC膜，再铺三层滤纸，每层均需完全清除气泡，上面铺两层海绵，合上转印盒，内加转膜缓冲液高于海绵。
3）转印：电泳槽内加冰块，灌入转膜缓冲液，300 mA转印65 min。
4） 封闭：转印结束后，将NC膜放入封闭液（10 g脱脂奶粉溶于100 ml TBST中，煮沸冷却）中，液面必须过膜，摇床上轻摇4 h，保证膜的所有部分同溶液接触。
5）洗膜：弃去封闭液，TBST洗3次，每次15 min。
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