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牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白fimA基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化((2)

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  5)琼脂粉(Agar powder):上海化学试剂公司

  6)脱氧胆酸钠:上海亚培生物科技有限公司

  7)丙烯酰胺、双丙烯酰胺、四甲基二乙胺(TEMED)、十二烷基磺酸钠(SDS)、二硫苏糖醇(DTT)、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、Tris碱、甘氨酸、溴酚蓝:Amresco USA

  8)考马斯亮蓝(Brilliant Blue R-250):上海绿岛科技发展有限公司分装

  9)ECL底物化学发光试剂盒:Pierce Biotechnology USA

  10)质粒小提试剂盒:北京天为时代科技有限公司

  11)硝酸纤维素膜(NC膜):浙江省台州市四甲生化厂

  12)一抗(Anti-his antibody,小鼠单克隆抗体IgG2b):北京天根生化科技有限公司

  13)二抗(Goat anti-Mouse IgG,(H+L),Perpxidase Conjugated):Pierce Biotechnology USA

  14)脱脂奶粉:完达山乳业股份有限公司

  15)其他生化试剂如溴化乙锭(EB)、冰醋酸、甲醇、过硫酸铵、无水乙醇、NaCl、CaCl2、MgCl2、氨苄青霉素、氯霉素等,均为进口或国产试剂

  3.1.3 实验仪器
  1)自动双重纯水蒸馏器SZ-93:上海亚荣生化仪器厂

  2)超纯水设备Elix3+Mil-GB:法国Millipore公司

  3)电子分析天平AA-250:Denver Instrument Company

  4)恒温磁力搅拌器78HW-1:杭州仪表电机厂

  5)电热恒温干燥箱PH030:上海市实验仪器厂有限公司

  6)数控超声波清洗器KQ-500DE型:昆山市超声仪器有限公司

  7)全自动高压灭菌锅HV-50:日本HIRAYAMA

  8)塑料薄膜封口机SG-200型:上海凯明电子机械有限公司

9)紫外线消毒灯ZSZ:北京海淀空后高温复合材料厂

  10)生物型洁净工作台BCM-1000A:苏净集团安泰公司

  11)微量移液器Research单道/多道:Eppendorf

  12)恒温培养箱HH.B11.420-BS:上海安亭

  13)大型摇床QYC-211:上海福马实验设备有限公司

  14)空气浴震荡器HZQ-C:哈尔滨市东明医疗器械厂

  15)离心机(台式低速)TDL-40B:上海安亭科学仪器厂

  16)离心机Sigma1-15(台式高速)和Sigma3K18(台式高速冷冻):Sigma

  17)离心机(超微型)E-Centrifuge:Wealtec公司

  18)微量振荡器ZW-A:江苏常州国华电器有限公司

  19)石英定时器SDD-2型:北京市长风仪器仪表公司

  20)电子恒温水浴锅DK-98-1:天津市泰斯特有限公司

  21)精密DRY BLOCK加热器HGT24:T&D

  22)酸度计420A:Thermo Orion

  23)核酸电泳仪EPS-301:Amersham Biosciences

  24)电泳槽DYCP-31D:北京六一

  25)紫外可见光分光光度计Ultrospec 3300:Amersham Biosciences

  26)凝胶成像系统Dolphin-Doc:Wealtec公司

  27)台式电脑:联想

  28)扫描仪ScanMaker 5900:中晶科技

  29)冷冻干燥系统Lyph-Lock 12 Liter:Laboconco公司

  30)普通冰箱NR-B22S1:无锡松下冷机有限公司

  31)低温冰箱925型:Forma Scientific

  32)STD3101-1蛋白电泳仪:Amersham Biosciences

  33)Hoefer MiniVE Vertical Electrophoresis System:Amershem Biosciences USA

  3.2 实验方法

   3.2.1 从大肠杆菌Top10中提取质粒pET15b与pET-15b-fimA

  从-70℃ 冰箱中取出携带有pET-15b和pET-15b-fimA的大肠杆菌TOP10菌珠,将细菌分别划线涂布于含Amp(100 μg/ml)的LB固体培养基平板上,倒置平板,37℃培养12~16 h后出现菌落。

  从培养平板中挑选氨苄青霉素抗性菌落,分别接种入5m1 LB培养基中(含Amp l00 μg/m1),37℃ 振荡培养16 h,质粒小提试剂盒分别提取质粒DNA。步骤如下:

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