HPLC?ELSD法测定甘草中3种甘草皂苷的含量

                         作者：叶静　肖美添，汤须崇，黄雅燕

【摘要】  目的 建立测定甘草药材中甘草皂苷G2、甘草酸铵、乌拉尔甘草皂苷B含量的方法。方法 采用HPLC?ELSD法，Hypersil C18柱(5 μm，4.6 mm×150 mm)，以甲醇?乙酸铵水溶液(0.2 mol/L) ?冰乙酸(体积比65∶34∶1)为流动相，流速1.0 mL/min， ELSD漂移管温度110 ℃， 载气(N2) 流速2.8 L/min。 结果 甘草皂苷G2、甘草酸铵、乌拉尔甘草皂苷B的线性范围分别为6.02～120.4，13.22～264.4，6.32～126.4 μg/mL(r值分别为0.999 6,0.999 7,0.999 8),平均回收率(n=6)为100.6%，100.8%和99.87%。结论 本法简便，重现性好，可用于甘草中甘草皂苷G2、甘草酸铵、乌拉尔甘草皂苷B含量的测定。

【关键词】  甘草;甘草皂苷G2;甘草酸铵;乌拉尔甘草皂苷B;HPLC?ELSD

Abstract:Objective o establish a quantitative method for determining the content of saponin G2, ammonium glycyrrhizinate and uralsaponin B in Glycyrrhiza uralensis. Method HPLC?ELSD method was used to analyze the three constituents. Samples were separated on an Hypersil C18 column (5 μm, 4.6 mm×150 mm) by using methanol?0.2 mol·L-1 ammonium acetate?glacial acetic acid (65∶34∶1) as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL·min-1 and the temperature of drift tube was set at 110 ℃. The gas flow (N2) was set at 2.8 L·min-1. Results The linear ranges of saponin G2, ammonium glycyrrhizinate and uralsaponin B were 6.02-120.4, 13.22-264.4 and 6.32～126.4 μg·mL-1, respectively and their average recoveries(n=6) were 100.6%，100.8% and 99.87% , respectively. Conclusion The method is convenient, reliable and can be used for analyzing saponin G2, ammonium glycyrrhizinate and uralsaponin B in Glycyrrhiza uralensis.

　　Key words:Glycyrrhiza uralensis; saponin G2; ammonium glycyrrhizinate; uralsaponin B; HPLC?ELSD

　 甘草是豆科植物Glycyrrhiza uralensis Fisch的干燥根茎和根,是常用且重要的中药材,具补脾和胃、益气复脉之功效[1]。现代研究发现甘草具有祛痰、止咳、利胆、解痛、降胃酸、抗炎、抗溃疡、抗肝毒素以及抗癌等药理作用[2]。近年来还发现其具有体外抗甲肝病毒、人体免疫缺陷病毒和SARs病毒的活性,临床上用于治疗慢性肝炎和艾滋病[3,4]。我国野生甘草主要生长在“三北”地区，尤其是内蒙古、甘肃、新疆、宁夏分布较多。甘草中主要有效成分为甘草皂苷类和黄酮类化合物[5]。有关甘草有效成分分离测定，文献报道的有TLC法[6]、GC法[7]和HPLC法[8], 为了更好地控制甘草的品质，本文采用HPLC?ELSD法测定甘草中3种皂苷类成分甘草皂苷G2、甘草酸铵、乌拉尔甘草皂苷B的含量。

　　1 仪器与试药

　　Shimadzu SPD?10A VP 高效液相色谱仪(配备CBM?102色谱工作站)，Alltech ELSD 2000型蒸发光散射检测器，超纯水器(Milipore)。

　　甘草药材购自江西省樟树药材市场，经本实验室鉴定;甘草皂苷G2、甘草酸铵和乌拉尔甘草皂苷B 对照品为本试验室用制备型HPLC 分离而得, 经IR、MS、1H?NMR、13C?NMR 等手段(方法)鉴定结构，HPLC法测定含量，以峰面积归一化法计算，含量均大于99.0%。乙腈、甲醇(色谱纯，Merck 公司)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件与系统适用性试验

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