甲基莲心碱纳米脂质体对小鼠脑缺氧以及脑栓塞的疗效观察(2)

　　2.1.3 NefNL的制备 按“2.1.2”项下操作，最后将脂质体初悬液经高压均质机在20 kpsi( 1.4 × 106 kPa )压力下经50 nm膜挤压乳匀5～8次，直至脂质体粗悬液由浑浊变为较澄清的微带蓝色乳光的纳米脂质体悬液。

　　2.2 亚硝酸钠所致小鼠脑缺氧实验[4]

　　取小鼠40只，随机分为4组，每组10只。分别为生理盐水阴性对照组、Nef注射液阳性对照组、普通Nef脂质体阳性对照组、NefNL组。于实验前3 d开始，每天尾静脉注射给药1次，给药剂量为30 mg/kg，第4天最后1次给药15 min后,腹腔注射NaNO2溶液(质量浓度25%)250 mg/kg。记录从注射亚硝酸钠开始至死亡时间，记为小鼠存活时间。结果见表1。表1可见，与生理盐水组相比，3种Nef制剂均可显著延长小鼠亚硝酸钠中毒后的存活时间(P<0.05);而与Nef注射液组相比，普通Nef脂质体组的存活时间差异无显著性，而NefNL组能显著延长小鼠存活时间(P<0.05)。表1 各种Nef制剂对亚硝酸钠所致小鼠脑缺氧后存活时间的影响

　　2.3 小鼠脑栓塞实验[5]

　　取小鼠40只，随机分为4组，每组10只。分组方法及前3 d给药方法同“2.2”，第4天最后1次给药15 min后，尾静脉注射诱导剂(胶原蛋白225 μg /只;肾上腺素9 μg/只)0.1 mL/10 g，以诱发动物急性脑栓塞形成。观察每组动物给予诱导剂后15 min内出现偏瘫、死亡及15 min内偏瘫后恢复正常的动物数，计算保护率(保护率=恢复数/10)。结果见表2。用简化直接概率法[4]进行统计比较，与生理盐水组相比，3种Nef制剂均能显著提高小鼠对抗脑栓塞的能力(P<0.05);与Nef注射液组相比，普通Nef脂质体组的保护率差异无显著性，而NefNL组能显著提高小鼠保护率(P<0.05)。表2 各种Nef制剂对诱导剂致小鼠脑栓塞的影响

　　3 讨论

　　一种药物只有通过BBB并在中枢保持有效浓度，才能在中枢发挥药效。Nef注射液已被证实能够通过小鼠BBB进入脑组织，且在脑组织中的浓度随给药剂量的增加而增加[1]。为进一步增加Nef的脑靶向性，本研究利用纳米脂质体为载体，制备NefNL，通过其对两种小鼠脑部病模的疗效，初步判断其脑靶向性。

　　本研究结果表明，与生理盐水组相比，3种Nef制剂均可显著延长小鼠给予亚硝酸钠后的存活时间，并能提高诱导剂所致小鼠脑栓塞的保护率(P<0.05)，提示Nef本身的心血管活性显著，可提高机体的血氧利用率，增加脑血流量，增加氧气供应，从而改善机体缺氧状态，并通过扩张脑血管，有效抑制脑血栓的形成[6]。同时，与同剂量Nef注射液及普通脂质体相比，NefNL可显著延长小鼠给予亚硝酸钠后的存活时间，并能提高诱导剂所致小鼠脑栓塞的保护率(P<0.05)。说明纳米脂质体作为Nef的载体，可进一步增加Nef在小鼠脑部的浓集，疗效显著增加。这是由于纳米脂质体的粒径在100 nm以下，这种微粒系统更容易使包封的药物进入BBB，从而提高疗效。关于NefNL的脑靶向性研究正在进行中。

【参考文献】
  　[1] 张会杰，熊玉卿.甲基莲心碱小鼠脑内分布的研究[J].中国药师，2010，13(1)：3-5.

　　[2] OLIVIER J C . Drug transportation to brain with targeted nanoparticles[J]. NeuroRx,2005,2 (1):108-119.

　　[3] 王小芹，何文，刘晓萌.N?三甲基壳聚糖包衣的盐酸阿霉素脂质体的制备[J].中国药师，2009，12(1)：39-42.

　　[4] 付守廷，付宇.黄答昔的耐缺氧作用[J].沈阳药科大学学报. 2001,18(3):207-210.

　　[5] 陈奇.中药药理研究方法学[M].2版.北京:人民卫生出版社，2006：38,783，579.

　　[6] 唐小卿，曹建国.甲基莲心碱的药理作用[J].中国药理学通报，2004，20(1)：7-10.

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