复方贞术调脂胶囊水提液精制方法研究(3)

　　2.4 丹酚酸B含量测定

　　2.4.1  色谱条件与系统适用性 

　　色谱柱：Kromasil C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：甲醇?乙腈?0.1%甲酸（24∶10∶66）；流速：1 mL/min；检测波长：286 nm；进样量：20 μL。

　　2.4.2 标准曲线绘制 

　　精密称取丹酚酸B对照品11.590 mg，加75%甲醇溶解制成每1 mL含0.231 8 mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液5、10、20、30、40、60 μL注入液相色谱仪，测定丹酚酸B色谱峰面积，以丹酚酸B微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。丹酚酸B的回归方程为y=8.7932x-0.1881，r=0.9999。在0.464～13.908 μg范围内峰面积积分值与丹酚酸B微克数呈良好的线性关系。

　　2.4.3 含量测定 

　　分别吸取对照品溶液、样品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液各20 μL 注入液相色谱仪中，测定峰面积，计算样品中丹酚酸B含量及转移率（见表1）。

　　2.5 总固体得率的测定 

　　分别精密量取样品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各50 mL，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，置烘箱内105 ℃干燥5 h，于干燥器内冷却至室温，称定，待恒重时，精密称重，计算总固体得率及转移率（见表1）。表1  不同精制方法比较结果（略）

    表1结果显示，水提液采用水醇法处理，总多糖、总酚酸损失较多，转移率仅分别约为33%和70%；超滤法、壳聚糖絮凝法处理，总多糖、总酚酸转移率较高；三种方法处理后，丹酚酸B转移率均较高。由于壳聚糖絮凝法具原料用量少、价廉且操作简单等特点，故综合考虑，确定复方贞术调脂胶囊水提取液采用壳聚糖絮凝法精制。

　　3  讨论

　　3.1  由于复方药物成分复杂，样品颜色较深，易对显色反应产生影响，导致含量测定不准确，故在总酚酸含量测定前通过大孔吸附树脂对样品溶液进行纯化，富集有效部位，消除干扰，使结果更准确、可靠。总酚酸含量测定通常采用紫外?可见分光光度法，实验中发现，如果以三氯化铁?铁氰化钾为显色剂，干扰因素较多，稳定性较差；以亚硝酸钠—硝酸铝显色，灵敏度较高，稳定性好，故采用亚硝酸钠—硝酸铝作为显色剂。
3.2  采用壳聚糖絮凝法对复方贞术调脂胶囊水提液精制处理，既保留了酚酸类、多糖等有效成分，又去除了杂质，与醇沉法相比，具有有效成分转移率高、工艺简单、成本低等优点；与超滤法相比，则克服了膜污染严重，使用寿命低，成本高等不足。壳聚糖作为天然澄清剂，利用电荷和大分子的架桥作用，在最大限度保留有效成分的同时，去除溶液中的不溶性颗粒、鞣质、蛋白质和树脂等杂质，且加入量少，成本低，安全无毒，在中药提取液的纯化领域具有较好的应用前景。

【参考文献】
  　　［1］唐春萍,郭姣.调脂灵对高脂血症大鼠脂代谢酶及载脂蛋白的影响［J］.广东药学院学报,2007,23(2):175-177.

　　［2］唐春萍,郭姣,杨超燕,等.调脂灵对高脂血症大鼠脂质过氧化、血液流变学的影响［J］.中药材,2007,30(7):837-839.

　　［3］唐春萍,郭姣.调脂灵对高脂血症大鼠降脂作用实验研究［J］.中国实验方剂学, 2007,13(5):24-27.

　　［4］房信胜,谭晓梅.大孔吸附树脂纯化丹参总酚酸的定性定量分析［J］.中国中药杂志,2005, 17(30):1331-1333.

　　［5］刘峰群,曹红,靳守东,等.比色法测定消癌平注射液中总酚酸的含量［J］.华西药学杂志,2003,18(3):220-222.

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