2 结果
经食管下括约肌腹侧壁行FB逆向神经元示踪研究显示，在NG 切片中共观察到79个FB示踪神经元。 将含有FB示踪神经元的NG切片进行荧光免疫组织化学双重染色，发现其中38个神经元（约48％）呈PACAP免疫阳性，而且部分神经元胞体同时含有神经元性一氧化氮合成酶 (nNOS)免疫阳性物（图1）。
3 讨论
以往对大鼠与小鼠经NG进行顺向神经元示踪发现,迷走传入神经末梢IGLEs多聚集在上消化道，呈覆盖在肌间神经节表面板层样、叶片状分布的神经末梢网。本研究小组在研究猪食管的神经支配时观察到，正常猪食管壁肌间神经节表面也含有叶片板层样神经末梢网结构，此结构呈PACAP及VIP免疫阳性[4]，而啮齿类动物大鼠的相应结构却呈谷氨酸免疫阳性， 可见种属之间IGLEs结构的神经化学方面存在明显的差异。 经左侧NG远侧端迷走神经干切断术后，发现猪食管LES腹侧壁PACAP免疫阳性神经末梢网明显减少[4]。本实验经LES腹侧壁行FB逆向神经元示踪还显示，NG 切片中观察到约79个FB示踪神经元, 其中38个呈PACAP免疫阳性（约占48％），部分神经元同时含有nNOS免疫阳性物。综合上述结果可以初步推断：见于猪食管肌间神经节内的PACAP免疫阳性神经末梢网很可能来源于迷走神经，为猪食管壁内的IGLEs。为进一步确定此结构，下一步需要作NG顺向神经元示踪的研究。 已有文献报道，种属之间在IGLEs神经化学特征方面存在着明显的差异。如钙离子结合蛋白Calbindin可以特异性免疫标记大鼠食管内IGLEs，但不能标记小鼠食管内IGLEs[6]。 因此，在确定了猪食管壁内的IGLEs形态、结构特点的同时，有必要进一步揭示其神经化学特征。目前，有关IGLEs神经化学特征方面的资料，主要来源于对大鼠及小鼠的研究。大鼠食管内IGLEs含有P物质(SP),大鼠及小鼠食管内IGLEs还含有谷氨酸囊泡转运蛋白（VGLUT2）免疫阳性反应物[1,2]，说明大鼠及小鼠食管内IGLEs可能通过释放SP或谷氨酸，影响肌间神经元的活动。透射电镜观察结果进一步表明,IGLEs内所含的分泌囊泡多聚集在特化的细胞膜周围，提示IGLEs可能与周围肌间神经元之间形成突触样结构。另外,大鼠及小鼠食管内IGLEs均已证明具有ATP受体，即呈P2X2或P2X3免疫阳性。因此，IGLEs还可能作为化学感受器，感受某些神经递质（如ATP、乙酰胆碱等）从肌间神经元的释放。临床上常见的食管运动功能障碍，如吞咽困难与胃?食管反流性疾病的发病机制，一直是人们亟待解决的问题[7]。有研究表明,分布在食管壁内的IGLEs可能与胃?食管反流性疾病的发病机制有关。因此，研究确定大型哺乳类动物食管壁内的IGLEs形态结构及神经化学特征，将有助于进一步从理论上揭示食管运动的神经支配机制，促进临床上胃?食管反流性疾病的深入研究。
【参考文献】
[1]RAAB M, NEUHUBER W L. Number and distribution of intraganglionic laminar endings in the mouse esophagus as de?monstrated with two different immunohistochemical markers[J]. Histochem Cell Biol, 2005,53(8):1023?1031.
[2]RAAB M, NEUHUBER W L. Intraganglionic laminar en?dings and their relationships with neuronal and glial structures of myenteric ganglia in the esophagus of rat and mouse[J]. Histochem Cell Biol, 2004,122(5):445?459.
[3]ZAGORODNYYUK V P, CHEN B N, COSTA M, et al. Mechanotransduction by intraganglionic laminar endings of vagal tension receptors in the guinea pig esophagus[J]. J Physiol, 2003,553(2):575?587.
[4]WU M, LI L, TIMMERMANS J P. Neurochemical mapping of the porcine esophageal innervation with special attention to the nitrergic and peptidergic components in the musculature [J]. Chin J Neuroanat, 2006,23(3)：253?261.
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