1.2.2 给药方法：将达纳康研成粉末状，用蒸馏水溶解并混匀，术后24 h按照0.5 ml/100 g予灌胃，单纯缺血组给予等量蒸馏水灌胃，各组灌胃均为1次/d，持续12周。
1.2.3 标本的收集与处理：大鼠经麻醉后，常规生理盐水及4%多聚甲醛灌注、固定，断头取脑，制作脑部冠状石蜡切片(厚度4 μm)，分别采用HE染色和免疫组化染色，检测脑组织病理变化和皮层、胼胝体及海马GEAP、CNPase阳性细胞数的情况。
1.2.4 统计学处理：实验数据用均数±标准差(±s)表示，SPSS 16.0统计软件进行统计学分析，采用单因素方差分析，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 组织病理学表现(HE染色) 假手术组未发现明显的病理变化;单纯缺血组可见神经元大量变性、坏死，胞体呈三角形，胞浆致密，周围出现空晕，白质内出现散在的神经纤维及髓鞘溃变，表明脑组织有明显的缺血及脑白质受损表现;EGb761组神经元变性坏死及脑白质受损均较单纯缺血组减轻。
2.2 大鼠脑胶质细胞CNPase及GFAP的变化情况
2.2.1 CNPase变化情况：各组均取皮层、胼胝体、海马处进行观察并统计CNPase阳性细胞个数。单纯缺血组CNPase阳性细胞数明显少于假手术组和EGb761组，差异均具有统计学意义(P<0.05)。结果见表1。表1 大鼠皮层、胼胝体、海马CNPase阳性细胞表达情况 注：单纯缺血组与假手术组比较，*P<0.01;单纯缺血组与干预组比较，◆P<0.01
2.2.2 GFAP变化情况：各组均取皮层、胼胝体、海马处进行观察并统计GFAP阳性细胞数。单纯缺血组GFAP阳性细胞数明显多于假手术组和EGb761组，差异均具有统计学意义(P<0.05)。结果见表2。表2 大鼠皮层、胼胝体、海马GFAP阳性细胞表达情况注： 干预组与单纯缺血组比较，◆P<0.01;单纯缺血组与假手术组比较，*P<0.01
3 讨论
少突胶质细胞(oligodendrocyte，OLG)是中枢神经系统的髓鞘形成细胞，在发生缺血缺氧性损伤后对神经系统正常功能的发挥产生严重的影响。而星形胶质细胞是中枢神经系统内在数目占绝对优势的一类胶质细胞, 被认为在神经元的整个发育过程中起重要作用[2]，它参与中枢神经系统内神经元功能的调节，在维持神经元的生存微环境中起着重要的作用。缺血性脑损伤后星形胶质细胞增生并产生许多生物活性物质， 对缺血损伤神经元具有保护作用;而过度增生可作为机械屏障影响髓鞘和轴索的再生，从而影响周围神经组织的结构修复和功能恢复。国际标准EGb761，含24%的银杏黄酮苷和6%的萜烯内酯等多种活性物质，现已证实，EGb中银杏黄酮为自由基清除剂， 银杏内酯为特异性PAF 受体阻滞药，对缺血时的神经元有保护作用。
本实验采用CNPase、GFAP分别标记少突胶质细胞和星形胶质细胞，应用EGb761对慢性脑缺血大鼠灌胃治疗，观察大鼠脑内少突胶质细胞及星形胶质细胞数量的变化。
OLG对缺血性损伤高度敏感性的机制包括氧化应激、兴奋性氨基酸和凋亡通路激活等[3]。(1)OLG中铁含量高，而谷胱甘肽含量却较低，清除自由基能力弱而且显著依赖于氧化磷酸化，因此容易受到氧化应激损伤[4]。另外，胶质细胞比神经元更易发生铁和铝的蓄积，加重氧化应激。许多体内外实验已证实EGb761能够清除自由基。EGb761通过抑制细胞氧自由基的释放削弱超氧自由基对少突胶质细胞的攻击，同时增强细胞抗缺氧能力。(2)OLG表达功能性谷氨酸的非NMDA受体，包括红藻氨酸受体和AMPA受体，故其对兴奋性氨基酸易感[5]。且OLG缺氧缺血时产生兴奋性损伤，胞内Na+的浓度急剧增高，局部谷氨酸浓度显著增加使AMPA、Kainate 受体过度活化，从而介导Ca2+内流增加，导致细胞内Ca2+超载。EGb761可抑制非竞争性NMDA受体，又能作用于谷氨酸受体活化水平，抑制受体活化后引起的一系列级联活化和离子通道的开放，从而对抗兴奋性氨基酸的神经毒性和Ca2+超载对细胞的损伤。(3)OLG含有丰富的神经鞘磷脂和酞基鞘氨醇，这两种化合物在体外试验中均可诱导细胞凋亡[6]。在利用黄嘌呤诱发PC12细胞凋亡模型，Zhou等[7]发现银杏内酯能削弱由黄嘌呤诱导的p53、c?Myc、Bax和Caspase?3蛋白酶等多种重要凋亡因子的表达，直接证实银杏内酯可拮抗细胞凋亡，并可在凋亡早期阻断其进程。结合本实验结果，EGb761干预组脑组织中的少突胶质细胞数量较单纯缺血组明显增加(P<0.01)，提示EGb761的确能够减轻OLG在慢性脑缺血时的损伤。
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