海单胞菌1株的分离和系统发育分析(3)

　　2.4  DNA的（G+C）mo1％含量
    菌株Y5 DNA的（G+C）mol%为47.5%，与其他海单胞菌基本一致。见表1。
　　2.516S rRNA基因序列及系统发育分析
    经PCR扩增获得菌株Y5 16S rRNA基因片段的长度为1 532 bp（序列见GenBank DQ279852）。将该序列经BLAST与GenBank中已收录的细菌基因序列进行比较，结果显示与其相似性最高的几种细菌依次是海单胞菌属的M.aquamarina（97%）、M.communis（97%）、M.pontica（95%）、M.dokdonensis（95%）、M.vaga（95%）等。
    
　　选取海单胞菌属已经确认的菌种、与海单胞菌属在分类学上同属海洋螺菌科或海洋螺菌目的部分菌株，以及海单胞菌属1984年独立以前所属的交替单胞菌属（科）的部分菌株（Alteromonas macleodii，Pseudoalteromonas haloplanktis）的16S rRNA基因序列，采用UPGMA法建立了系统发生树，结果显示菌株Y5和其他已经确认的9种海单胞菌都位于系统发生树的同一独立的类群中，并且与M.aquimarina位于同一个进化枝中。
　　3 讨 论
    1983年，VAN LANDSCHOOT和DE LEY在研究原交替假单胞菌科交替假单胞菌属的A. communis和A. vaga时发现，这两种细菌在生理、遗传学等方面均不同于该属的其他细菌，因而建立了海单胞菌属，并将这两种细菌更名为M. communis和M. vaga［1］。海单胞菌属属γ-变形菌纲海洋螺菌目海洋螺菌科，目前已经确认了9个菌种，其中M.primoryesis、 M.aquamarina、M.pontica、M.ushuaiensi、M.dokdonensis和M.polaris等6种是2003年以后才报道的，可推测该属细菌可能还有更多菌种有待发现。目前还未见有从中国本土分离出该属细菌的报道。2005年10月，我们在研究双齿围沙蚕消化道菌群组成时分离出1株细菌，经研究确认其属于海单胞菌属。
    菌株Y5为革兰染色阴性直杆菌，无芽孢，其生长具有嗜盐性，且可耐受浓度达130 g/L的NaCl；氧化酶、触酶试验均阳性，能分解利用葡萄糖，不还原硝酸盐；此外，其细胞脂肪酸组成和DNA（G+C）mol%等生物学特征均与其他大多数海单胞菌基本一致。该菌的16S rRNA基因序列经BLAST与GenBank中已收录的细菌基因序列进行比较显示，与海单胞菌属的细菌相似性为95%～97%。根据该序列建立的系统发育树显示，菌株Y5与其他海单胞菌处于同一分支，由此可见，菌株Y5在分类学上应属于海单胞菌属。此外，该系统发生树还显示，所有海单胞菌都位于系统发生树的同一类群中，与海洋螺菌科其他菌属细菌的距离较近，而与交替假单胞菌的进化距离较远，从而进一步证实了VAN LANDSCHOOT等在分类学上对海单胞菌定位的正确性。
    
　　但是，菌株Y5的部分生物学性状又不同于其他海单胞菌［1］,例如，菌株Y5可分解利用的碳源、氮源的种类少，生长温度范围广（4～40 ℃），NaCl耐受程度高，尤其是该属其他细菌多是单极端鞭毛，而本文通过鞭毛染色、电子显微镜观察、动力实验等未能发现菌株Y5鞭毛的存在。此外，其16S rRNA基因序列与海单胞菌属其他细菌相似性最高为97%，这一数值在被公认的同一菌属不同菌种16S rRNA基因序列同源性鉴别范围内［6］，因此该菌株目前尚不能定种，推测其可能为海单胞菌属的未报道种。因此，综合该菌的上述生物学、遗传学性状，推测其为海单胞菌属的一个新种，暂命名为沙蚕海单胞菌（Marinomonas aibuhitensis sp. nov），目前还需要与该属的模式菌进行DNA-DNA杂交实验做进一步分析。
    由于海单胞菌属细菌大多是新发菌种，海单胞菌属细菌的其他研究报道很少，其中M.mediterranea 是第一个被发现的能表达多酚氧化酶的原核生物［7］。双齿围沙蚕属于环节动物门多毛纲游走目沙蚕科，通常出现在海边潮间带的石下或海藻间。自然环境中的沙蚕主要以废水里的有机物为食，被称为“泥滩的清洁工”，由此推测其体内可能具有多种生物活性物质或特殊的微生态菌群，以帮助沙蚕抵抗外界污染环境的损害。海单胞菌菌株Y5作为双齿围沙蚕消化道的常驻菌，其生物功能、与环境和宿主的关系还有待于进一步研究，该菌株的分离为丰富我国海洋微生物物种提供了又一重要资源。

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