夜香树花提取物体外抗肿瘤作用的实验研究(2)

　　集落形成率(%)=克隆数/接种细胞数×100%

　　集落抑制率(%)=1-克隆数/对照组克隆数×100%

　　2.4 统计学处理 以SPSS 10.0统计软件分析,两组间的均数比较采用t检验。

　　3 结果

　　3.1 MTT法 CN花不同提取物对SGC7901、Bele7404和Hela细胞株增殖的影响。结果见表1。表1 CN花不同提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

　　表1结果显示，总浸膏和正丁醇浸膏对3种肿瘤细胞株增殖均有抑制作用，抑制率与空白对照组比较有显著性差异，且抑制率与浓度成正比，其中正丁醇浸膏的抑制作用更为明显。总浸膏对SGC7901、Bele7404和Hela的IC50分别为28.10，49.82，27.70，而正丁醇浸膏的分别为18.44，19.00，19.49 μg/ml。

　　3.2 集落形成法 CN花不同提取物对SGC7901、Bele7404和Hela细胞株集落形成的影响。结果见表2。

　　表2结果显示，在浓度为10 μg/ml下，总浸膏和正丁醇浸膏对3种肿瘤细胞株的集落形成均有不同程度的抑制作同，与空白对照组比较(P<0.01)，都有显著性差异。

　　4 讨论

　　体外筛选抗肿瘤药物具有用药少、周期短、费用少等优势，且其筛选结果与体内实验的相关性好，因此已被一些研究机构作为常规的抗肿瘤药物初筛手段[6]。MTT法有灵敏度高、稳定性好、快速、操作简便、可评价率高、测定结果客观等优点[7]，近年来MTT法已取得丰硕成果，其方法学日臻完善，更接近临床，更具有实用价值，广泛用于化疗药物筛选和生物学及医学研究中[8]。而集落形成法能反映单个细胞的增殖能力，通过集落计数可对克隆原细胞作定量分析，能较灵敏地测定抗癌药的活性，目前被认为是一种较理想的检测方法[3]。表2 CN花不同提取物对肿瘤细胞集落形成的影响与空白对照组比较，*P<0.01;n=3

　　实验首先对CN花提取物总浸膏和正丁醇浸膏进行MTT法实验，结果表明总浸膏和正丁醇浸膏对人胃癌细胞SGC7901、人肝癌细胞Bele7404和人宫颈癌细胞Hela的增殖均有抑制作用，且抑制作用呈明显的剂量关系，尤其正丁醇浸膏的作用明显。在浓度为80 μg/ml时，正丁醇浸膏的抑制率约在80%，并且对3种细胞的IC50均小于20 μg/ml，而总浸膏的IC50接近20 μg/ml，原因可能是总浸膏所含杂质多，也说明了CN花提取物的主要有效成分主要集中在正丁醇部位。按体外抗肿瘤疗效评价规定[9]：植物粗提物的IC50小于20 μg/ml时，则可断定药物在体外对肿瘤细胞有杀伤作用。通过集落形成法对实验进一步验证，结果也表明其总浸膏和正丁醇浸膏能抑制细胞集落的形成。

　　CN花提取物在体外实验具有一定的抗肿瘤作用，但其抗瘤作用的真正机理、取物中究竟是何种成分在发挥作用以及体内是否具有抑瘤作用尚不明确，需深入进行研究。实验为对CN花进一步研究提供了一定的理论依据。

【参考文献】
  　[1] 赵世元,钟振国,廖 文,等.夜香树提取物体外抗肿瘤作用的实验研究[J].天然产物研究与开发,2008, 20(1):125.

　　[2] 盘永才.具有抗肿瘤活性的甾醇、萜类天然药物及其提取与分离方法[J].世界医药,2006,12(5):15.

　　[3] D.L.斯佩克特.细胞实验指南,第2版[M].北京：科学出版社,2001:819.

　　[4] 钟振国,张凤芬,甄汉深,等.美味猕猴桃根提取物抗肿瘤作用的实验研究[J].中医药学刊,2004,22(9):1705.

　　[5] 于春艳,李 薇,刘玉和,等.白花蛇舌草提取物体外抗肿瘤作用及机制研究[J].北华大学学报(自然科学版),2004,5(5):412.

　　[6] 张均田.现代药理学实验方法学[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1998:818.

　　[7] Awadak, yoneT, Ueokah, et al. com Parison of the mosensitivity test: clonogenic assay versus MTT assay[J].Acta Medokayam.2002, 56(3): 129.

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