荞麦花叶总黄酮对大鼠2型糖尿病胰岛素抵抗的影响(2)

　　1  材料与仪器

　　1.1  药品与试剂荞麦花叶为甜荞麦子粒收割后自然干燥的花叶（来自内蒙古库伦旗），其水提取物经乙醇溶解过滤后，用旋转蒸发器回收乙醇，浓缩干燥即得荞麦花叶总黄酮（经中国医学科学院药物研究所鉴定提取物中总黄酮含量为92.2%）。罗格列酮（RSG,葛兰素史克有限公司，批号：20060916）;四氧嘧啶(alloxan) （美国Sigma公司）；胰岛素（江苏万邦生化医药股份有限公司，批号：20070105）；胰岛素放射免疫分析试剂盒(原子高科股份有限公司)；胆固醇（北京双旋微生物培养基制品厂）；蔗糖（北京拜尔迪生物公司）；L－谷氨酸钠（北京拜尔迪生物公司）；1,2－丙二醇（天津北方天医化学试剂厂,分析纯），考马斯亮蓝试剂盒（美国Sigma公司），血肌酐、游离脂肪酸、糖化血红蛋白等测定试剂盒（南京建成生物工程研究所），甘油三酯、总胆固醇测定试剂盒（浙江东瓯生物工程有限公司），其他试剂为国产分析纯。

　　1.2  仪器血糖仪（韩国All Medicus公司），TGL-16型冷冻低温离心机（上海安亭科学仪器厂），日立7150全自动生化分析仪（日本），722型分光光度仪（北京市六一仪器厂），数码照相机（日本佳能公司），电热恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂），Motic Med 6.0数码医学图像分析系统（北京航空航天大学），电热恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂），FT630G型微机多探头放免仪（北京市核仪器厂），MP200A型电子天平（上海），无菌操作台（上海），玻璃研磨器（天津）。

　　1.3  动物清洁级SD大鼠，雄性，体质量（200±20）g，北京中国医学科学院实验动物研究所提供，合格证号为SCXK11-00-0006。

　　2  方法

　　2.1  大鼠糖尿病模型SD雄性大鼠70只,随机抽取10只作为正常对照组,每天灌胃蒸馏水,其余60只大鼠每天灌胃脂肪乳(猪油2 g,胆固醇0.5 g,谷氨酸钠0.1 g,蔗糖0.5 g,果糖0.5 g,吐温2 ml,丙二醇3 ml,丙硫氧嘧啶0.1 g,加水至10 ml),第14天腹腔注射四氧嘧啶100 mg/kg，隔日1次，共3次，同时继续灌胃脂肪乳。末次腹腔注射四氧嘧啶72 h后,用血糖仪测定空腹血糖,用毛细血管法判定胰岛素抵抗［3］，其方法为：待测大鼠禁食不禁水12 h，腹腔注射胰岛素0.05 U/kg，选取注射前，注射后15，30，60，120 min，5个时间点测血糖，用KITT值表示(以血糖为纵坐标,时间为横坐标,直线回归得回归系数r乘以100即KITT)，以空腹血糖≥16.7 mmol/L,同时KITT小于正常对照组的60％作为2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠,造模成功52只。

　　2.2  分组与给药将52只2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠随机分5组：模型对照组11只,灌胃水10 ml/kg；阳性药物组11只，灌胃RSG1 mg/kg，TFBFL低、中、高剂量组（L- TFBFL，M- TFBFL，H- TFBFL）各10只，分别灌TFBFL100，200，400 mg/kg。上述各组大鼠上午8点灌胃给药,2 h后灌胃脂肪乳,连续6周。

　　2.3  检测指标末次给药后禁食12 h，用血糖仪及配套血糖试纸测FBG，OGTT；比色法测定TG，TC，FFA，GHb；放免法测定FINS，计算ISI评价胰岛素抵抗的程度。按文献［4］方法：ISI等于FBG与FINS乘积倒数的自然对数，即ISI=Ln［1/（FINS×FBG）］; HE染色观察胰腺和肾组织形态学改变。

　　2.4  数据处理实验数据用SPSS10.0软件处理，以±s表示，用方差分析和t检验进行组间比较。

　　3  结果

　　3.1  TFBFL对糖尿病大鼠血糖、胰岛素和胰岛素敏感指数的影响与正常对照组相比，模型对照组血糖和胰岛素明显升高（P<0.01，P<0.05），而ISI明显降低（P<0.01），说明已形成糖尿病胰岛素抵抗，类似2型糖尿病。TFBFL能明显降低血糖（P<0.05），高剂量组与阳性对照药罗格列酮相近。TFBFL高剂量组与阳性对照药罗格列酮能明显增加ISI（P<0.05）。结果见表1。表1  TFBFL对糖尿病大鼠TBG，FINS和ISI敏感指数的影响（略）

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