苜蓿总皂苷提取物抗动脉粥样硬化和降血脂的实验研究(2)

　　1 材料与仪器

　　1.1 受试药物苜蓿总皂苷提取物，由中山市中健药物研究所有限公司提供，批号：060828，061010。加蒸馏水配成所需浓度，4℃保存备用。

　　1.2 药品和试剂绞股蓝总苷片，由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供，批号：E6A003，规格：每片含绞股蓝总苷20 mg，药片粉碎后加蒸馏水配成所需浓度，4℃保存备用;丙硫氧嘧啶片，由上海复星朝晖药业有限公司提供。批号：070901，规格：每片含丙硫氧嘧啶50 mg;维生素D3注射液，由上海通用药业股份有限公司提供，批号：080401，规格：7.5 mg/ml。总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL?C)测定试剂盒，高密度脂蛋白胆固醇(HDL?C)测定试剂盒，批号分别为011M042、010M050、012L028、012L028，均由上海名典生物工程有限公司提供;胆固醇，由上海科瑞生物有限公司提供;戊巴比妥钠，由北京化学试剂公司提供，批号：20071019;食用猪油，由宜昌双汇食品有限责任公司提供。

　　1.3 仪器Spctrumlab 53 power紫外分光光度计，上海棱光技术有限公司产品;TB?718E组织自动包埋机，湖北泰维医疗科技有限公司提供;TC?120S组织自动脱水机，湖北泰维医疗科技有限公司提供;RM2135石蜡切片机，德国Leica公司产品;HM525冰冻切片机，德国Microm公司产品;80?2B型台式离心机，上海安亭科学仪器厂;电子精密天平，奥豪斯公司;恒温水浴锅，北京市医疗设备厂提供;WH?1微型旋涡混合仪，上海泸西分析仪器厂。

　　1.4 动物Wistar大鼠，SPF级，体质量(200±10)g，雄性，由湖北省实验动物研究中心提供，许可证号：SCXK(鄂)2003?0005。

　　2 方法[1，2]

　　2.1 造模取雄性大鼠50只，每只大鼠右下肢肌肉注射维生素D3 3×105U/kg，并给予高脂饲料(2%胆固醇，0.5%胆酸钠，3%猪油，0.2%丙基硫氧嘧啶，94.3%基础粉末饲料，维生素D3粉剂1.25×106 U/kg)，7 d后行球囊损伤手术。另取10只作为空白对照，给予普通饲料。

　　球囊损伤手术：动物用戊巴比妥钠(35 mg/kg体重)腹腔麻醉，仰卧固定，皮肤消毒，正中切开颈部皮肤，分离左侧颈总动脉，结扎远心端，插入球囊，进入约8 cm，球囊内注入0.2 ml生理盐水，向回拉动3～4 cm，放水再进入约8 cm，注水、回拉，共3次。拔出球囊，层缝合皮下组织、皮肤。消毒切口皮肤，切口处洒适量注射用青霉素粉剂。术后连续7 d给予肌肉注射青霉素，切口处用碘酒消毒。

　　2.2 分组及给药术后按体质量随机分为5组。苜蓿总皂苷高剂量组：苜蓿总皂苷提取物0.7 g/kg;苜蓿总皂苷中剂量组：苜蓿总皂苷提取物0.35 g/kg;苜蓿总皂苷低剂量组：苜蓿总皂苷提取物0.18 g/kg;阳性组：绞股蓝总苷片56 mg/kg;模型组：等体积蒸馏水，灌胃同时给予高脂饲料;空白组：等体积蒸馏水，灌胃同时给予普通饲料。按体质量1.0 ml/100 g灌胃，1次/d，连续给药90 d。

　　2.3 取样及检测指标末次给药后，禁食不禁水12 h，断头取血，3 000 r/min离心15 min，分离血清。用紫外分光光度计测定血清总胆固醇(TCH) (PAP法)，甘油三酯(TG)(PAP法)和高密度脂蛋白(HDL?C)(PTG?Mg2+ ?PAP法)的含量;并计算低密度脂蛋白(LDL?C)的含量和动脉粥样硬化指数(AI)。

　　分离主动脉，纵行切开，0.9%生理盐水冲洗干净，苏丹Ⅲ染色，照相，以百分率法算出斑块面积占动脉壁总面积的百分率，按分级法统计主动脉病变级别。计量资料以组间t检验进行统计比较，等级资料以秩和检验进行统计比较，百分率以卡方检验。主动脉斑块分级标准：0级?内膜表面光华，无奶油色变化，即无斑块;0.5级?内膜有广泛的奶油色或乳白色变化，但无凸出于表面的斑块;1级?有明显的奶油色凸起斑块，面积小于3mm2;2级?斑块面积大于3mm2;3级?有许多大小不等的斑块，有的融合成片，大块的斑块面积超过3mm2;4级?动脉内膜表面几乎为全为融合的斑块所覆盖。

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