高效液相色谱法测定六味能消胶囊中蒽醌类成分的含量(2)

　　2.4  阴性对照溶液的制备按全方比例分别称取除大黄外其他药材适量，按六味能消胶囊的制备工艺制得缺大黄的阴性样品，照供试品溶液制备项下方法制备阴性样品溶液。

　　2.5  各样品溶液的HPLC色谱图分别吸取供试品溶液，阴性对照溶液各10 μl及对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。记录其色谱图，结果表明六味能消胶囊中大黄5个蒽醌类成分色谱峰分离良好，且阴性样品溶液无干扰。见图1～3。

　　2.6  线性关系的考察分别精密吸取对照品溶液4，8，12，16，20 μl，按上述色谱条件，测定峰面积。以色谱峰峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程。芦荟大黄素：Y=1.049×106X+1.801×104，r=0.999 5；大黄酸：Y=9.897×105X +9.265×103，r=0.999 9；大黄素：Y=8.998×105X+1.081×104，r=0.999 9；大黄酚：Y=1.138 ×106X +2.459×104，r=0.999 6；大黄素甲醚：Y=8.902×105X+8.912×103，r=0.999 9。结果表明，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚均在0.064～0.32 μg范围内，大黄素甲醚在0.032～0.16范围内呈良好的线性关系。

　　2.7  精密度实验精密吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，连续测定5次，测得峰面积，计算峰面积积分平均值得：芦荟大黄素为158 593.4，RSD为1.65% ；大黄酸为76 566.8，RSD为1.38%；大黄素为69 302.4，RSD为1.03%；大黄酚为188 509.7，RSD为1.17% ；大黄素甲醚为60 542.4，RSD为1.56%。结果表明精密度良好，均符合定量分析要求。

　　2.8  稳定性实验精密吸取供试品溶液10 μl，分别在制备后0，2，4，8，12 h进样，测定色谱峰峰面积， 计算峰面积积分平均值得：芦荟大黄素为165 311.7，RSD为1.58%；大黄酸为78 702.6，RSD为 1.36% ；大黄素为68 541.8，RSD为1.07% ；大黄酚为193 217.5，RSD为1.28% ；大黄素甲醚为61 175.2，RSD 为1.75%。结果表明样品溶液在12 h内稳定。

　　2.9  重复性实验分别取同一批供试品，按样品测定项下方法，重复制备样品6次，进行测定，计算含量平均值得：芦荟大黄素为0.671，RSD为1.89%；大黄酸为0.338，RSD 为1.13% ； 大黄素为0.323，RSD为1.39% ；大黄酚为0.725，RSD为1.75%；大黄素甲醚为0.285，RSD为1.95%。样品中5个大黄苷元的总含量平均值为2.342，RSD为1.25%。结果表明供试品制备方法重复性良好。

　　2.10  回收率实验采取加样回收法。精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每毫升含芦荟大黄素0.10 mg，大黄酸0.06 mg，大黄素0.06 mg，大黄酚0.10 mg，大黄素甲醚0.06 mg的溶液备用。取已知含量的样品约1g，共6份，精密称定，分别精密加入上述对照品溶液：芦荟大黄素5 ml(0.50 mg)，大黄酸5 ml(0.30 mg)，大黄素5 ml(0.30 mg)，大黄酚5 ml(0.50 mg)，大黄素甲醚5 ml(0.30 mg)，总量为1.90 mg，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率。芦荟大黄素的平均回收率为99.07%，RSD为2.19%；大黄酸的平均回收率为101.16%，RSD为2.31% ； 大黄素的平均回收率为99.36%，RSD为1.79% ；大黄酚的平均回收率为100.31%，RSD为2.04%；大黄素甲醚的平均回收率为101.52%，RSD为2.75%。

　　2.11  样品含量测定分别精密称取3批样品，按供试品溶液的制备项下方法制备，按上述色谱条件进行测定。结果见表1。表1  3批样品含量测定（略）
　
　　3   讨论

    《中国药典》2005年版Ⅰ部中，大黄样品溶液的制备采用的是8%的盐酸水解［1］。根据文献［2］，我们对酸水解条件进行了筛选，选择了盐酸、硫酸、盐酸与乙醇的混合液进行对比研究，采用盐酸与硫酸水解方法所测定的含量偏低，误差较大，故选择盐酸与乙醇混合液作为水解的方法。

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