消瘀化痰方对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞凋亡和Caspase3蛋白表达的

              作者：赵润生 张一盺 苗卉 周桦 吴翟 李昌

【摘要】  　　目的观察中药消瘀化痰方对非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠肝细胞凋亡和肝组织caspase 3蛋白表达的影响，探讨其防治NAFLD的部分作用机理。方法采用高脂饮食喂饲大鼠复制NAFLD模型，以东宝肝泰为对照药，运用流式细胞仪观察各组大鼠肝细胞凋亡及肝组织caspase 3蛋白表达的变化，同时采用HE染色观察各组大鼠肝组织形态学变化。结果镜下可见模型组大鼠肝脏中度以上脂肪变性，并有少量的肝细胞坏死；流式细胞术分析可见其细胞凋亡率明显增高（P＜0.01），caspase 3蛋白表达FI值增高（P＜0.01）。与模型组比较，各用药组肝脂变程度显著改善，肝细胞的凋亡率明显下降（P＜0.01），caspase 3蛋白表达FI值降低（P＜0.01）。结论消瘀化痰方通过抑制caspase 3蛋白的表达，抑制肝细胞的凋亡，以达到抗脂肪肝作用。

【关键词】  消瘀化痰方 非酒精性脂肪肝 细胞凋亡 Caspase 3蛋白

　　Abstract:ObjectiveTo observe the effect of Xiao-Yu-Hua-Tan-Yin on hepatic apoptosis and caspase3 in nonalcoholic fatty liver rats (NAFLD) . MethodsThe nonalcoholic fatty liver rat model was fed by high fat forage, and Dongbaogantai was treated as control group. Flow cytometry (FCM) was used to detect the hepatic apoptosis and expression of caspase3, and optical microscope was used to observe the degree of hepatic steatosis. ResultsLiver cells showed medium or serious steatosis by optical microscope, and a few hepatic necrosis. The rate of cell apoptosis and expression of caspase3 detected by FCM in the model group was significantly increased(P＜0.01). Compared with the model group, liver fat cell denaturizing was improved,and the rate of cell apoptosis and expression of caspase3 was significantly decreased in each treatment group(P＜0.01). ConclusionXiao-Yu-Hua-Tan-Fang can inhibit hepatic apoptosis inhibiting by the expression of caspase3, and protect nonalcoholic fatty liver.

　　Key words:Xiao-Yu-Hua-Tan-Fang;  Nonalcoholic fatty liver disease；  Cell apoptosis;  Caspase 3 protein

    消瘀化痰方为笔者在临床上治疗非酒精性脂肪肝（NAFLD）的效方，既往药效学实验已证实其具有显著的调节血脂和抗脂肪肝作用［1］，但其治疗作用机制尚不十分清楚。研究发现，肝细胞的凋亡与增生在NAFLD的病理变化中非常显著［2］。但是，有关中药对NAFLD肝细胞凋亡影响的研究报道较少，本研究旨在通过观察消瘀化痰方对NAFLD大鼠肝细胞凋亡及肝组织caspase 3蛋白表达的影响，以探讨其作用机制。

　　1  材料与仪器

　　1.1  动物健康雄性SD大鼠50只， 体重180～200 g，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，合格证号：SCXC（鄂）2004-007。

　　1.2  药物及试剂

    消瘀化痰方的组成与制备：消瘀化痰方由泽泻、丹参、海藻、生黄芪、制半夏、生大黄、郁金、决明子、生山楂、柴胡、炒白术组成，以上药物先用乙醇提取，挥发去酒精，然后将全部药渣加水适量，普通方法煎煮，将提取液与煎煮液混合，浓缩成所需浓度。

    东宝肝泰片：通化东宝药业股份有限公司出品，批号为H22024764。实验时用0.5%的羧甲基纤维素钠配制成所需浓度的混悬液。碘化丙啶、RNA酶、鼠抗人caspase 3蛋白单克隆抗体、羊抗鼠FITC-IgG等均由美国sigma公司提供。

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