大鼠骨骼染色透明标本的研究

1                                       李文 黄飞 王利民 赵冬梅 刘希伟 刘洪付 孙毅 张璐萍

【摘要】  目的 本研究通过制作不同幼龄大鼠骨骼染色透明标本来探讨大鼠骨骼染色透明标本制作的基本方法，为实验动物透明标本的制作和普及奠定基础。方法 随机抽取生后8～23 d的大鼠为研究对象，按照脱水、净化、再脱水、氢氧化钾处理、染色、透明、保存等步骤制作大鼠骨骼染色透明标本。结果 制作好的大鼠透明标本肌肉和软组织结构无色透明，骨骼界限明显，易于识别，其中第8天大鼠的透明效果明显优于第23天大鼠。结论 新生大鼠骨骼染色透明标本的制作与其它动物的透明标本制作有明显不同，且透明效果与鼠龄相关。 
【关键词】  新生大鼠；骨骼染色； 透明标本

    【Abstract】  Objective  Different neonatal rats’ transparent stain rat skeletal specimens were made to explore the basic method of making laboratory animal’s transparent sample.Methods  Neonatal rats aged from 8 days to 23 days were selected randomly, according to dehydration, purification, dehydration, potassium hydroxide, dyeing, transparent, and other steps，the rat skeletal specimens were made.Results  The making good specimens had easily identifiable muscle and soft tissue, the transparent effect of the eight days was better than the 23 days. Conclusion  The procedure of neonatal rat specimen had difference with other animals, and the effects of transparent associated with the age.
    【Key words】  neonatal rat,bone stain,transparent sample
    1858年，Beal首次制作出人体的胚胎透明标本，1897年，Schulze用2％～3％的氢氧化钾茜素红及甘油制作了胚胎骨骼的染色标本，1958年，我国钟世镇院士等［1］用丙酮、氯仿、乙醚、冰醋酸混合液加速脱水制作了冬青油透明标本。目前关于透明标本的制作已经引起了广大科学家的兴趣［2，3］。随着科学技术的不断发展，关于透明标本的制作方法也层出不穷，但是关于大鼠骨骼染色透明标本制作方法的探讨却很少。本研究通过制作大鼠骨骼染色透明标本来探讨动物骨骼染色透明标本制作的基本方法，为实验动物透明标本的制作和普及奠定基础。
    1  材料与方法
    1.1  取材  制作透明标本的材料要求新鲜，本实验选用滨州医学院动物中心提供的新生Wistar大鼠为实验对象。日龄从出生后第8天至第23天。
    1.2  方法
    1.2.1  去脑，去内脏：取新生大鼠，窒息死亡后常规消毒，从前囟做切口去除脑组织，经腹前正中切口通过膈肌进入胸腔，将胸腹腔的内脏完全去除，过程中注意保护胸骨和肋弓。去除组织后，用流动的清水进行清洗，去除残余血液。
    1.2.2  脱水：处理好的大鼠控干水份后，置于95％酒精中固定1周。期间可换液一次。
    1.2.3  净化：1周之后，将固定好的大鼠从95％酒精中取出，放入3％重铬酸钾溶液中进行净化，时间为1周。
    1.2.4  再脱水：将净化好的标本放入重新配制的95％酒精中，进行再脱水处理１周。
    1.2.5  透明：再脱水处理后的标本置于2％氢氧化钾中6 h。此步骤的操作要结合大鼠的年龄和体重。年龄大、体质量重的大鼠浸泡时间要相应延长，当观察到肌肉可以轻轻用镊子插透的时候可以取出。

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