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一——
入耐高温微波盒中,800W加热直至沸腾,将组织切片置于切片架上,放入已沸腾的柠檬酸盐缓冲液中,继续加热2×lOmin,取出冷却至室温。其余步骤同上。
每批试验均设有阴性、阳性对照,PBS代替一抗作为阴性对照,已知阳性切片作为阳性对照。
2.5免疫组化S-P法阳性结果判断
结果由本院病理科专科医师在不知临床资料及实验目的情况下统计,采用半定量积分法,选染色均匀区,计数阳性细胞百分率及其着色强弱。
PTEN以胃腺体上皮细胞或癌细胞胞浆中出现明显的黄色、棕黄色或黄褐色颗
粒为阳性。根据陈永平“”评分标准进行半定量积分法判断结果,阳性细胞≤5%为0分,6%~25%为’1分,26%~50%为2分,51%~75%为3分,>75%为4分:
染色强度黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;两者积分相乘,0分为阴性(一),
1~4分为弱阳性(+),5~8分中度阳性(++),9~12分为强阳性;(一)~(+)
视为低表达,(++)~(+++)视为高表达。
VEGF以癌细胞或血管内皮细胞胞浆中或胞膜上出现明显的黄色、棕黄色或黄
褐色颗粒为阳性。根据Volm“”评分标准进行半定量积分法判断结果(稍加修改),
根据着色细胞占视野细胞总数的多少计为O~3分,无着色细胞计为0分,
≤25
%为1分,26~50为2分,>50%为3分;根据阳性细胞的着色强度按无着色、黄色、棕黄色和棕褐色分别视为0、1、2、3分,根据两项积分之和判断其结果,
0分计为(一),1~2分(+),3~4分(++),5~6分(+++);(一)~(+)视为阴性,(++)~(+++)视为阳性。
ⅢP一2以胃癌细胞胞浆中或胞膜上出现明显的黄色、棕黄色或黄褐色颗粒为阳性。根据Shimizu“71评分标准进行半定量积分法判断结果(稍加修改),阳性细胞数按无着色、阳性细胞数小于t/3、l/3—2/3和大于2/3分别视为0、l、2、3分,根据阳性细胞的着色强度按无着色、黄色、棕黄色和棕褐色分别视为0、1、2、3
分,根据两项积分之和判断其结果,0分计为(一),【~2分(+),3~4分(++),5~6分(+++);(一)~(+)视为阴性,(++)~(+++)视为阳性。
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