沙蚕激酶全基因在大肠杆菌中表达及溶栓作用检测(3)

    3  讨    论
    鉴于天然合成的抗血栓药物的副作用较大，目前许多国家都在试图从天然动植物和微生物中寻找抗血栓药物［8］。丝氨酸蛋白酶家族依据其一级结构中催化位点附近氨基酸的不同，可分为不同的亚家族，包括似糜蛋白酶亚家族(SA)、似枯草溶菌酶亚家族(SB)和似α/β水解酶亚家族(SC)。各亚家族在其催化活性中心Ser、His和Asp附近均有高度保守的氨基酸序列。来自真核生物的具有消化和纤溶活性丝氨酸内肽酶属于SA亚家族，在其催化活性中心Ser附近有高度保守的“GDSGGP”氨基酸序列。本文利用青岛大学医学院医药生物技术重点实验室专利基因249 bp的沙蚕激酶基因，将其克隆入原核表达载体pGEX4T-2，并在相应的宿主菌中进行诱导表达，获得GST融合蛋白，超声裂解细菌后，取上清进行纯化。采用大鼠动-静脉旁路血栓模型，研究沙蚕激酶抑制血栓形成及溶栓的作用。实验结果表明，沙蚕激酶具有抑制血栓形成和激活纤溶系统作用，可明显使血栓质量减小，且具有剂量依赖性，随着剂量的增加纤溶和抑制血栓形成效果更加明显。但在此实验中FIB没有明显的变化，考虑沙蚕激酶是否主要水解纤维蛋白而很少水解FIB，若如此则不易诱发出血，这尚需进一步研究。
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