2.1.5 仿生酶解液的制备取“2.1.3”项下一份样品液，煮沸15 min，放冷，调节pH 2.0，移至37 ℃恒温水浴锅中，保温10 min，加入1%胃蛋白酶，2 h后取出，调节pH 7.5，移至55 ℃恒温水浴锅中，保温10 min，加入1%胰蛋白酶，3 h后取出，离心(4 000 r/min)10 min，取上清液，微滤(0.22 μm)，超滤(相对分子质量3 000)，收集相对分子质量小于3 000部分，浓缩至1∶0.5，即得仿生酶解液。
2.2 抗肿瘤作用的比较[7]
2.2.1 对S180荷瘤小鼠的影响无菌抽取传代8 d的S180腹水小鼠腹腔肿瘤细胞，加入生理盐水调整浓度至4×109个/L，于每只小鼠右腋下注射0.2 ml，接种140只。接种24 h后，将小鼠随机分为7组，每组20只，即模型组、原粉组、水煎煮组、胃蛋白酶酶解组、胰蛋白酶酶解组、仿生酶解组与阳性对照组。模型组灌胃生理盐水10 ml·kg-1，连续10 d;原粉组、水煎煮组、胃蛋白酶酶解组、胰蛋白酶酶解组、仿生酶解组均5 g药材·kg-1药液，连续10 d;阳性对照组腹腔注射环磷酰胺，剂量30 mg·kg-1，连续3 d;给药量均为10 ml·kg-1。第11天，各组动物颈椎脱臼处死，剥离肿瘤、胸腺、脾脏，称重，计算抑瘤率、胸腺与脾脏指数，计算公式如下：
抑瘤率(%)=(空白组瘤重均值-样品组瘤重均值)/空白组瘤重均值×100%
胸腺(脾脏)指数=重量(mg)/体质量(g)
2.2.2 对H22荷瘤小鼠的影响建模方法、给药方式、剂量均同S180荷瘤小鼠(对照组为5-Fu，25 mg·kg-1)。
2.3 统计学方法实验数据采用SPSS 10.0统计软件进行分析，所有测定数值以±s表示，采用方差分析法进行分析，P<0.05为有显著性差异，P<0.01为有极显著性差异。
3 结果
3.1 对S180荷瘤小鼠的影响
3.1.1 对S180荷瘤小鼠抑瘤率的影响结果见表1表1 对S180荷瘤小鼠抑瘤作用的影响
3.1.2 对S180荷瘤小鼠脾脏、胸腺指数的影响结果见表2表2 对S180荷瘤小鼠免疫器官的影响
3.2 对H22荷瘤小鼠的影响
3.2.1 对H22荷瘤小鼠抑瘤率的影响结果见表3表3 对H22荷瘤小鼠抑瘤作用的影响
3.2.2 对H22荷瘤小鼠脾脏、胸腺指数的影响结果见表4表4 对H22荷瘤小鼠免疫器官的影响
4 讨论
壁虎在临床上常用于肿瘤，特别是消化道肿瘤的治疗，一般焙干研细或水煎煮入药，但壁虎起抗肿瘤作用的物质基础还不清楚。小分子肽抗肿瘤作用逐渐引起了人们的注意。越来越多的研究表明，动、植物含有小分子肽具有很好的抗肿瘤作用，世界上许多国家正在竞相研究开发小分子肽类抗肿瘤的防治药物，如谷胱甘肽、海参五肽、槲寄生肽、胸腺五肽等[8，9]。本研究运用酶解的方式，使壁虎含有的蛋白类成分酶解成小分子肽，对其抗肿瘤作用进行研究。研究结果表明，壁虎经酶解后的抗肿瘤作用明显高于原粉组与水煎煮组。
本实验中的壁虎仿生酶解是指模拟人体消化过程，先用胃蛋白酶酶解，再以胰蛋白酶酶解的方法，对壁虎药材进行酶解。
小分子肽的界限划分迄今未有明确定义，鉴于国内外热门研究小分子肽的相对分子质量都在3 000以下[10]，本实验中3种酶解液均为经过超滤所得的相对分子质量小于3 000的小分子肽。
【参考文献】
[1] 叶云珍. 中药壁虎的研究进展[J].中药材，2009，32(7):1160.
[2] Shimonishi Y. Peptide Science-Present and Future[M].Dordrecht:Kluwer Academic Publishers，1999:436.
[3] 王爱华，柳美玲，戴志明，等.小肽的吸收机制与营养价值研究进展[J].上海畜牧兽医通讯，2008，2:7.
[4] 王克夷.开发小肽，筛选新药[J].中国生化药物杂志，2003，24(1):48.
[5] 钱 方，邓 岩，刘 阳，等.胃蛋白酶水解大豆蛋白的研究[J].中国乳品工业，2001，29(3):10.
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