葡萄胎组织MMPs与TIMPs表达及意义

【关键词】  基质金属蛋白酶类 基质金属蛋白酶组织物抑制物 葡萄胎
 ［ABSTRACT］ObjectiveTo explore the expressions of MMPs and TIMPs in hydatidiform mole and their clinical significance.MethodsThe mRNA expressions of MMPs and TIMPs were detected by RT?PCR in tissue of hydatidiform mole (n=35) including six malignant transformed mole and normal villi (n=18).ResultsThe ratios of MMP?9/TIMP?1 mRNA expressions were significantly higher in the malignant transformed mole than those in the nonmalignant one and normal villi（F=3.62,q=3.82,3.57,P<0.05）. The differences in expressions of MMPs and TIMPs were not significant in all cases (P>0.05). Positive correlation between MMP?7 and MMP?9 expression was noted (r=0.985,P<0.01).ConclusionIt is certain that the ratios of MMP?9/TIMP?1 mRNA expression plays a role in predicting malignancy of hydatidiform mole.
    ［KEY WORDS］matrix metalloproteinases; tissue inhibitor of matrixnetalloproteinases; hydatidiform mole
    葡萄胎属于良性肿瘤，但是它具有潜在恶变的性能，虽然长期备受学者们的关注，但目前为止仍无理想的预测恶变的方法。虽然血绒毛膜促性腺激素（HCG）可作为一种较敏感的标志物用于预测葡萄胎的恶变，但是它有一定的滞后性。而基质金属蛋白酶（MMPs）几乎可降解细胞外基质（ECM）中除多糖以外的所有成分,是调节ECM动态平衡的最重要的一大酶系。基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs) 能与相应的MMPs 酶原及其活化形式结合,从而抑制MMPs的活性及产生,阻止肿瘤发生恶变和转移，因此，TIMPs的调节失衡在肿瘤的侵袭及转移中可能起重要作用。本研究通过检测基质金属蛋白酶及其抑制物MMP?7、MMP?9、TIMP?1及TIMP?2 mRNA在正常绒毛和葡萄胎组织中的表达水平，探讨它们与葡萄胎恶变间的关系，为临床治疗提供依据。
    1  资料与方法
    1.1  一般资料
    35例葡萄胎病例均为2001年1月～2003年1月在青岛大学医学院附属医院住院病人，经病理检查诊断为葡萄胎，清宫前均未进行预防性化疗；病人年龄22～36岁，中位年龄28岁；平均孕周为12周；随访期间有6例恶变为侵蚀性葡萄胎，其诊断参照宋鸿钊[1]提出的侵蚀性葡萄胎的诊断标准，列为葡萄胎恶变组（A组），其余病人作为萄胎未恶变葡组（B组）。18例行人工流产健康妇女作为对照组，随访后未发生滋养细胞疾病或持续性血HCG升高；病人年龄23～36岁， 中位年龄28岁；平均孕周为12周。
    1.2  方法
    1.2.1  新鲜标本的收集与处理  所有标本均在清宫时收集，取宫腔小水泡组织约0.5 g，置于 1.5 mL DEPC处理EP管中，立即置-79 ℃冰箱中备用。 
    1.2.2  RT?PCR方法  所有引物均由上海生工生物有限公司合成，以GAPDH为内参照。组织样本匀浆破碎后，按照Trizol（Invitrogen公司）说明提取总RNA，用紫外分光光度计测定RNA样品于波长260和280 nm处的吸光度，以观察所提取RNA样品的纯度，并计算其含量；取1 g总RNA按照PromegaA3500逆转录试剂盒说明合成cDNA；取3 μL 逆转录产物，2.5 μL buffer,1.5 μL MgCl2,0.5 μL dNTP,上下游引物各1.25 μL，Taq酶0.2 μL，最后加入去离子水至25 μL。开始94 ℃变性5 min，然后94 ℃预变性30 s；MMP?9、MMP?7、TIMP?1及TIMP?2分别行54、57、53、57 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共30个循环；最后72 ℃延伸10 min，4 ℃保存；取5 μL PCR产物，1 μL上样缓冲液于20 g/L的琼脂糖凝胶中电泳60 min，在紫外线下凝胶成像。

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