花果山银杏叶中黄酮化合物的提取与测定(2)

　　2.3  标准溶液最大吸收波长测定分别将槲皮素、山萘酚和异鼠李素标准品及样品溶液用紫外分光光度仪在200～800 nm进行扫描，获得最大吸收波长并加以选择，以防止其他成分干扰。

　　2.4  最佳色谱条件测定通过对流动相中水和甲醇比值、流速及缓冲溶液的选择等多个方面的改变，获得将槲皮素、山萘酚和异鼠李素分离的最佳条件。

　　2.5  标准曲线的制作取标准品溶液，在最佳色谱条件下，分别进样2.5，5，10，15，20，30 μl，以峰面积（mV/min）为纵坐标Y，以进样量（μg）为横坐标X，分别作槲皮素、山萘酚和异鼠李素线性回归曲线。

　　2.6  样品中槲皮素、山萘酚和异鼠李素含量测定和计算取“2.2”制备的样品液（1～6号）1 ml分别稀释于10 ml容量瓶中，在最佳色谱条件下，各进样15 μl，测样品中槲皮素、异鼠李素、山萘酚的峰面积A1，A2，A3，由3者的标准曲线及回归方程，采用外标法，获得进样黄酮量，按下式算出槲皮素、山萘酚和异鼠李素的含量。
   
　　C=（X/15×250）/m样品
   
　　式中：C-样品中黄酮的含量（mg/g）
      
　　X-进样溶液中黄酮的量（μg）
       
　　m样品-样品的质量（g）

　　2.7  总黄酮苷含量计算银杏叶中含有30多种黄酮类化合物，主要以糖苷形式存在，直接测定银杏黄酮苷的含量较困难，因为种类太多分离困难、对照品不易得。而这些苷中的苷元主要是槲皮素、山萘酚和异鼠李素，通过其苷元的含量再换算成总黄酮苷含量。槲皮素（quercetin）的分子量是302.2，山萘酚（kaempferol）和异鼠李素（isorhamnetin）的分子量分别是286.24和316.27。据报道，槲皮素鼠李糖-对羟基桂皮酰葡萄糖苷（分子量为756.7）是银杏对心血管系统的主要有效成分，所以被应用作为有效成分含量测定时计算的依据，即黄酮苷与苷元分子量比值取r=756.7/302.2=2.51。

　　2.8  重复性实验分别精密称取样品3粉末3份，在相同的条件下提取溶液，在选定的色谱条件下测定峰面积。
   
　　重复性越好说明实验的精密度越好，重复性一般用相对标准偏差（RSD）表示。将被测样品进样3次，根据得到峰面积计算相对标准偏差。

　　2.9  精密度实验精密吸取样品3稀释液15 μl，在最佳色谱条件下，连续进样3次，测得峰面积，计算其标准偏差和RSD值。

　　2.10  加样回收率实验分别准确移取已知含量的样品1～3号1 ml于3个10 ml容量瓶中，各加入槲皮素标准溶液（288 μg/ml）0.1 ml，混合均匀，按黄酮类化合物的分析方法进行检测，计算槲皮素的回收率。

　　3  结果

　　3.1  标准溶液最大吸收波长槲皮素、山萘酚、异鼠李素3种黄酮苷元和样品的UV 吸收曲线表明，其最大吸收波长虽略有差异，但在390 nm处均有较强的吸收，故选择390 nm为检测波长。

　　3.2  标准曲线在选定条件下，3种黄酮苷元的标准曲线测定结果见表1。表1   银杏黄酮苷元的线性回归曲线（略）

　　3.3  样品中黄酮含量测定结果见表2。表2   样品中黄酮含量
样品号样品质量（略）

    由表2可知，槲皮素含量在样品1中最高，为0.459%；其次是样品4，为0.362%，这两个样品采于淮工数十年生银杏。千年生银杏叶与百年生银杏叶的含量相差不大；山萘酚含量在样品2中最高，为0.191%，其次是样品3，为0.134%，说明秋季样品山萘酚含量随树龄呈递减趋势；异鼠李素含量在样品3中最高，为0.240，其次是样品6，为0.194%。这两个样品均采于千年生银杏，说明异鼠李素含量随树龄呈递增趋势，春季样品各黄酮含量均明显高于同种秋季样品。

百度搜索“77cn”或“免费范文网”即可找到本站免费阅读全部范文。收藏本站方便下次阅读，免费范文网，提供经典小说医药类花果山银杏叶中黄酮化合物的提取与测定(2)在线全文阅读。