17β-雌二醇对缺氧缺血性脑病新生大鼠海马CA1区细胞凋亡的影响

【摘要】  目的 观察17β-雌二醇（17β-E2）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型脑细胞凋亡及血清sFas、sFasL水平的影响。方法 将7日龄SD大鼠75只随机分为假手术组、HIBD组以及HIBD+E2组，每组25只。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA法）分别测定血浆sFas、sFasL的含量，TUNEL法检测脑细胞凋亡率。结果 HIBD+E2组与HIBD组相比，CA1区的凋亡细胞数明显减少，尤其在24 h最明显；sFas、sFasL水平在各个时间点均明显降低，尤其在48 h最明显(F=2.37~21.02,q=2.32~8.34,P<0.05、0.01)。结论 腹腔内给予17β-E2可明显减少HIBD模型鼠海马CA1区细胞凋亡，sFas、sFasL水平呈明显回降。

【关键词】  缺氧缺血,脑；雌二醇；细胞凋亡；抗原,CD95

    ［ABSTRACT］  Objective  To study the effect of 17β-estradiol on cerebrocellular apoptosis of poxic-ischemic brain damage (HIBD) in neonatal rats, and on serum sFas， sFasL level in brain tissue.  Methods  Seventy-five 7-day old Wistar rats were evenly divided into sham-operation, HIBD and HIBD+E2 group. The number of cerebrocellular apoptosis was detected by HE and TUNEL and plasma sFas and sFasL measured by ELISA.   Results  In the intervention group, the number of apoptotic neurons was much fewer than that in HIBD group (P<0.01), and concentration of sFas and sFasL was much lower than that in control group, especially in 48 h (P<0.05,0.01).   Conclusion  17β-estradiol could inhibit neuronal apoptosis to protect neurons and attenuated brain injury after HIBD in neonatal rats. And the concentration of sFas and sFasL in the intervention group was lower than that of the control group.

    ［KEY WORDS］  Hypoxia-Ischemia, brain; Estradiol; Apoptosis; Antigens, CD95

    新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)是新生儿常见且致残、致死率较高的疾病，其发病机制尚未完全明确。但已证实多种细胞因子参与了HIE的发病过程［1］。研究结果表明，HIE与细胞凋亡有关，17β-雌二醇（17β-E2）能有效地抑制海马区细胞的凋亡，但其具体机制不明。本研究在制备缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠模型的基础上，观察17β-E2对海马神经细胞凋亡的影响及HIE新生大鼠血清sFas、sFasL水平的改变，以探讨17β-E2在HIBD疾病中的作用机制。

    1  材料与方法

    1.1  材料

    TUNEL试剂盒（Roche company，Germany）；sFas、sFasL定量ELISA试剂盒（上海森雄科技实业有限公司）；128C-340型酶标扫描仪（悦泰洋行）；CY-12C型便携式数字测氧仪（杭州梅城电化分析仪器厂）。

    1.2  方法

    1.2.1  实验分组  取7日龄SD雌性新生大鼠75只，随机分为假手术组（A组）、HIBD组（B组）及HIBD+E2（C组）组，各25只。每组又分为6、12、24、48、72 h等5个时段，每时段有5只动物。

    1.2.2  HIBD模型制备  分离出左、右颈总动脉并结扎。空气中放置30~120 min后，将大鼠置于有机玻璃低氧舱内，维持氧体积分数在0.08(0.07~0.09)，舱内温度控制于（36±1）℃，湿度为70%±5%，持续3 h。假手术组：动物只游离两侧颈总动脉，但不结扎之，以消除手术及手术中应激的影响。

    HIBD+E2组:手术前2 h腹腔注射17β-E2 100 μg/kg。各组在实验结束后于不同时间点自股静脉采血，分离血浆后，取大脑组织，置冰箱中保存待检。

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