清肺抑火片质量标准研究(2)

　　2.2  黄柏

    　取清肺抑火片1片,研细,加甲醇10 mL,加热回流30 min,滤过,滤液作为供试品溶液。另取黄柏对照药材50 mg,加甲醇5 mL,同法制成对照药材溶液。另取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。再按处方比例和制备方法制备缺苦参的阴性样品,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述溶液各1 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲醇-水(10∶6∶1∶1)为展开剂,置氨蒸气预饱和的展开缸内,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性无干扰。

　　2.3  前胡

   　 取清肺抑火片10片,研细,加三氯甲烷40 mL,超声处理10 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为供试品溶液。另取前胡对照药材0.5 g,同法制成对照药材溶液。再按处方比例和制备方法制备缺前胡的阴性样品,按供试品溶液制备方法制成缺前胡的阴性对照溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述3种溶液各10 μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯(19∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性无干扰。

　　3  含量测定

　　3.1  色谱条件

    　色谱柱：ODS C18(10 μm,250 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)；检测波长280 nm；流速：1 mL/min；柱温25 ℃；理论塔板数按黄芩苷峰计算不得低于2 500。

　　3.2  溶液的制备

　    对照品溶液的制备：精密称取在60 ℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含黄芩苷60 μg的溶液,即得。
   
　　供试品溶液的制备：取本品10片,除去薄膜衣,研细,取细粉约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇100 mL,密塞,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。

  　  阴性对照溶液的制备：取除黄芩以外的其余药味,按制备工艺制备不含黄芩的样品,按供试品溶液制备方法制成不含黄芩的阴性对照溶液。

　　3.3  测定法

 　   分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL,注入高效液相色谱仪,测定,即得。

　　3.4  线性关系的考察
  
　　制备浓度为65 μg/mL的黄芩苷甲醇溶液,微孔滤膜滤过,依次进样2.5、5、7.5、10、15、20 μL,对所得峰面积和各对照品进样量作回归处理,得黄芩苷标准曲线,并计算得黄芩苷回归方程：Y＝2 734.336 24X－4.427 33,r＝0.999 9。结果表明,黄芩苷的量在0.163～0.975 μg线性范围良好。

　　3.5  精密度试验

    　取同一批号样品溶液,重复进样6次,每次10 μL。结果供试品中,黄芩苷峰面积积分值RSD＝0.8%(n＝6),表明仪器精密度良好。

　　3.6  重现性试验

  　  取同一批样品(批号20070401),分别按供试品溶液制备方法制备5份样品,照上述色谱条件测定,测得黄芩苷的平均含量19.48 mg/g,RSD＝1.35%(n＝5)。

　　3.7  稳定性试验

　　取同一批号样品溶液,每隔2 h进样1次,每次10 μL,进样6次,结果6次含量RSD＝2.27%,表明样品溶液在10 h内基本稳定。

　　3.8  回收率试验
   
　　取已知含量的清肺抑火片样品(批号20070401)6份,分别添加黄芩苷对照品适量,按供试品溶液的制备方法制成供试溶液,依法测定,结果平均回收率97.43%,RSD＝1.97%,见表1。表1  回收率测定结果（略）

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