大孔吸附树脂分离纯化龙须藤总黄酮的工艺研究(2)

　　2.2.2  样品含量测定  龙须藤洗净，晾干，置恒温干燥箱中于75 ℃下干燥8 h，取出粉碎，过筛(20目)，所得粉末干燥保存备用。按下述试验条件回流提取后，将粗提取液过滤，浓缩，放置冷却后定容于100 mL量瓶中。精密吸取样品溶液1.0 mL置10 mL量瓶中，再精密吸取溶液1.0 mL，按“2.2.1”项下方法，自“加水至6.0 mL”起依法测定吸光度，代入回归方程计算出样品溶液中总黄酮的提取率（总黄酮提取率＝总黄酮质量/龙须藤质量×100％）。

　　2.3  大孔树脂的筛选
   
　　选择4种极性、孔径、比表面等参数不同的大孔树脂(DA?101、AB?8、HP?20和H?103)，分别用静态吸附法和静态解吸法测定其吸附与解吸性能，以确定实验用树脂。

　　2.3.1  大孔树脂预处理  称取上述4种树脂适量，用乙醇浸泡树脂24 h后，分别上柱进行预处理，用体积分数95％乙醇流动清洗，检查流出的乙醇液至乙醇液与水1∶5混合不呈白色混浊为止，然后以大量蒸馏水冲洗，至水洗液无醇味为止。

　　2.3.2  静态吸附实验  称取4种处理好的大孔树脂(DA?101，AB?8，HP?20，H?103)2 g，分别加入龙须藤黄酮提取液10 mL置25 mL三角瓶中，每间隔10 min振荡1次，持续4 h后，静置24 h，使达到饱和吸附，过滤，测定滤液中黄酮含量，按［吸附率=(初始浓度-吸附后浓度)／初始浓度×100％］计算吸附率，结果见表1。

　　2.3.3  静态解吸实验  将静态吸附后的树脂过滤抽干，各加入体积分数50％乙醇20 mL，每间隔10 min振摇1次，持续4 h后，静置24 h。测定洗脱液中龙须藤黄酮的含量，按［解吸率=(洗脱液浓度×洗脱液体积)/(初始浓度-吸附后浓度)×吸附液体积×100％］计算解吸率，结果见表1。

　　比较各种树脂的吸附率和解吸率，综合分析，以AB?8型大孔树脂对龙须藤黄酮的吸附分离效果较佳，故选择AB?8大孔树脂作为实验用树脂。

　　2.4  大孔树脂纯化工艺研究

　　2.4.1  正交试验［5］  采用AB?8型大孔树脂对龙须藤黄酮提取液进行分离纯化，对树脂分离纯化过程中的主要因素如大孔树脂用量、洗脱剂(乙醇)浓度、乙醇用量等进行考察，因素水平表见表2，正交试验结果见表3。

　　2.4.2  结果分析  以总黄酮质量分数为考察指标进行直观分析和方差分析，结果见表3和表4。可见各因素影响程度大小为C>B>A，其中C因素(树脂用量)有显著影响，A2B3C3为各因素的最佳水平，确定A2B3C3为较优树脂纯化工艺条件，即采用AB?8型大孔树脂，树脂用量为4倍生药量，洗脱剂采用体积分数50％乙醇，洗脱剂用量为16倍生药量。

　　2.4.3  验证试验  取龙须藤黄酮提取液，按照A2B3C3条件重复3次，结果3批样品中黄酮平均质量分数为5.25％，从提取液中的转移率为83.67％，表明该工艺条件合理，能较大程度地分离富集龙须藤黄酮。

　　表2  因素水平表（略）

　　Table 2  Factors and Levels

　　表3  正交试验结果（略）

　　Table 3  Result of orthogonal experiment

　　表4  方差分析结果（略）

　　Table 4  Variance analysis results

　　3  讨论
   
　　大孔树脂是一种多孔性高分子材料，具有多孔性和较大的比表面积，主要通过物理作用从溶液中有选择性地吸附有机物质，从而达到分离纯化的目的。AB?8为聚苯乙烯型非极性吸附树脂，表面有一定的酯基，亲水性得到改善，但吸附机理仍为疏水性吸附。该树脂的比表面积和孔径较大，适合于吸附具有一定疏水性的中药成分，吸附量较大，洗脱容易，吸附动力学性能良好。对热、有机溶剂和一般使用条件下的酸、碱稳定，使用寿命较长。对蛋白、糖类、无机酸、碱、盐、小分子亲水性有机物均不吸附，因而可将一般中药成分与这些物质分离。

百度搜索“77cn”或“免费范文网”即可找到本站免费阅读全部范文。收藏本站方便下次阅读，免费范文网，提供经典小说医药类大孔吸附树脂分离纯化龙须藤总黄酮的工艺研究(2)在线全文阅读。