维药罗勒提取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞环氧化酶-2酶活性的影响

                 作者：何志琴，艾尼瓦尔·吾买尔，阿布力孜

       阿布杜拉，田树革，加米拉·托乎提，周文婷，依巴代提·吐乎提

【摘要】  　　目的探讨维药罗勒不同提取部位在体外对COX-2酶活性的影响，进而找出该药的抗炎作用机制及有效部位群。方法MTT法筛选维药罗勒不同提取部位的细胞给药浓度，并对脂多糖诱导的RAW264.7细胞进行不同时间的药物干预，用ELISA法检测细胞上清液中PGE2的含量。结果各部位在不同时间内均对PGE2有抑制作用，其中醋酸乙酯及正丁醇部位对PGE2有较大的抑制作用。结论维药罗勒可通过直接抑制COX-2的酶活性产生抗炎作用，醋酸乙酯及正丁醇部位是该药的有效部位群。

【关键词】  罗勒； 环氧化酶； 抗炎； 有效部位群

　　Abstract：ObjectiveTo study the effect of Uighur Ocimum basilicum L. on COX-2 enzyme activity in LPS-induced RAW264.7 cells , and find its anti-inflammatory mechanism and effective parts. MethodsMTT method was used to the eligible concentration of different polar extracts of Uighur Ocimum basilicum L. . After RAW264.7 were interfered with 2 mg·L-1 LPS for 8 h , and then different polar extracts of Uighur Ocimum basilicum L. for 30 min , the concentration of PGE2 in supernatant was analyzed by ELISA . After RAW264.7 cells were pretreated with different polar extracts of Uighur Ocimum basilicum L. for 30 min , and then 2 mg·L-1 LPS for 24 h , the concentration of PGE2 in supernatant was analyzed by ELISA . ResultsThe concentration of PGE2  was inhibited by different polar extract of Uighur Ocimum basilicum L. . The inhibition ratio by acetidin part and n-butanol part were higher .ConclusionThe anti-inflammatory activity of Uighur Ocimum basilicum L. was related to inhititing the activity of COX-2 enzyme, and the effective parts are acetidin part and n-butanol part .

　　Key words： Ocimum basilicum L.;   Cyclooxygenase-2;  Anti-inflammatory activity;  Effective parts
   
　　罗勒Ocimum basilicum L．是唇形科罗勒属植物，是维吾尔医应用历史悠久的常用药材之一，有抗炎、抗氧化、降血脂、祛痰等作用［1］。江国华等［2］的研究表明，罗勒的抗炎机制与其抑制前列腺素(PGE2)生物合成有关。PGE2是一种与炎症紧密相关的重要介质，环氧化酶-2(COX-2)为PGE2生物合成的重要限速酶，在遇到外界刺激如脂多糖(LPS)、致癌基因等时可在巨噬细胞、滑膜细胞、内皮细胞等中高表达。许多非甾体抗炎药就是通过抑制COX-2的酶活性或酶蛋白表达，降低其催化产物PGE2的生物合成来达到抗炎镇痛的疗效。本文探讨了维药罗勒对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7细胞COX-2酶活性的影响，进一步研究维药罗勒抑制PGE2生物合成的机制。目前对维药罗勒药理作用的研究主要采用的是提取物，研究表明其乙醇提取物往往有更好的效果，所以本文进一步对维药罗勒的乙醇总提取物及4个不同萃取部位进行研究，筛选出该药的有效部位群。

　　1  材料与方法

　　1.1  试剂DMEM干粉(Gibco)，胎牛血清FBS(杭州四季青)，双抗(Sigma)，MTT(Sigma)，胰蛋白酶(Sigma)，DMSO(Sigma)，ELISA试剂盒(武汉中美科技有限公司)，其他试剂均为国产分析纯。

　　1.2  药物制备将从新疆吐鲁番采集的罗勒全草阴干后，剪碎，称取适量药材，用70%乙醇室温密闭浸泡1 h后超声30 min，提取3次，合并滤液，减压浓缩回收乙醇得提取物，取部分提取物加适量水分散后，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取，包括母液共得到5个不同极性的提取部位，用OBL-乙醇总提取物、OBL-石油醚，OBL-氯仿，OBL-醋酸乙酯，OBL-正丁醇表示，分别减压浓缩回收各部位溶剂，挥干溶剂后，进行冷冻干燥。实验时，用二甲基亚砜(DMSO)溶解干燥物，15 000 r/min离心10 min，取上清，热压灭菌后，-20 ℃保存备用，实验前用DMEM培养基稀释成所需浓度。

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