2015-2016生物药物分离纯化技术实验指导 - 图文(4)

在该柱层析分离色素实验中，我了解了柱层析技术的相应方法和原理，学会了层析柱的制作和准备，进一步了解绿叶中色素的组成及各色素的颜色和性质、洗脱液的配比、层析柱的制作及洗脱液的流速是本实验成功与否的三大关键因素。

知识拓展：

1、溶剂的选择：

（1）吸附剂要求较纯，否则会影响样品的吸附和洗脱。 （2）溶剂和吸附剂不能起化学反应。

（3）溶剂的极性应比样品小，如果大了，样品不宜被吸附剂吸附。

（4）溶剂对样品的溶解度不能太大，否则影响吸附，但也不能太小，溶液的体积增加，易使色谱分散。

（5）可使用混合溶剂，如有的组分含有较多的极性基团，在极性小的溶剂中溶

解度太小。也可选用极性大的溶剂溶解，然后加入一定量的非极性溶剂。这样既降低了极性，又减少了溶液的体积。

2、洗脱剂的选择：

样品吸附在氧化铝柱上后，用合适的溶剂进行洗脱，这种溶剂称为洗脱剂。如果原来用于溶解样品的溶剂冲洗柱不能达到分离的目的，可以改用其他溶剂，一般极性较强的溶剂影响样品和氧化铝之间的吸附，容易将样品洗脱下来，达不到分离的目的。

因此常用一系列极性渐次增强的溶剂，既先使用极性最弱的溶剂，然后加入不同比例的极性溶剂配成洗脱溶剂。常用的洗脱溶剂的极性按如下次序递增。 己烷和石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜三氯乙烯＜二硫化碳＜甲苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜丙醇＜乙醇＜甲醇＜水＜吡啶＜乙酸。

实验十一 活性炭吸附分离色素实验

一、实验目的

（1）了解吸附的基本原理；

（2）掌握活性炭、木炭的静态和动态吸附的基本操作技术。 二、实验原理

活性炭具有较大的比表面，在水溶液中比一般固态物质吸附能力强很多，故可以吸附许多物质的分子及离子，本实验用活性炭、木炭静态和动态吸附溶液中的色素。 三、实验仪器

离心机、大烧杯（≥500ml）、烧杯（250ml）、高精度pH试纸、大容量瓶、移液管、玻璃棒等。 四、材料和试剂 1.材料

胡萝卜或红心萝卜8kg、活性炭粉8kg、脱脂棉1包。 2.试剂

（1）石蕊试剂500ml、浓硝酸500ml高锰酸钾400g；‘

（2）组织捣碎机、烧杯、U形管、漏斗、直通管、导管、漏斗架、胶塞、玻璃管、橡皮圈等。

四、实验步骤

注意事项：

（1）、活性炭使用前一定要经过处理，增强他的吸附活性，实验前要将木炭或活性炭放在坩埚里烘烤，充分进行解吸。

（2）、选用有色液体不要太浓，否则吸附不干净可能会出现色带，得不到无色清液

（3）、榨取的胡萝卜汁在活性炭脱色前，应进行过滤前处理，避免汁液过黏影响吸附效果。 （4）、所用锥形瓶在实验前应该是干燥的。 六、结论 七、思考

1、木炭和活性炭那种吸附剂的吸附效果好？

2、实验中第一步和第二步用同样的胡萝卜色素和活性炭，哪步吸附效果显著？

实验十二 卵磷脂制备

实验十三银耳多糖的制备及鉴定和含量测定

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