鸡卵类粘蛋白分离提纯、活性测定与相对分子质量测定(3)

2.7纯化结果

表8 结果

步骤 丙酮-TCA粗提 DEAE-Cellulose-52纯化 总体积/mL 8.6 3.4 总蛋白/mg 6.923 0.354 总抑制活力/U 86000 8330 比活力U/mg 132 74 收率/% — 83 纯化倍数 — 0.56 2.8讨论

2.8.1取鸡蛋清时应注意不要取出蛋黄。

2.8.2每一步要详细记录实验数据以及各步骤必要的时间，对于较多的试剂应事先做好分类，明确每一步应该加入的试剂及试剂量，防止加错试剂对实验造成的影响。

2.8.3做蛋白质纯化实验时，由于步骤较多应做好人员的分配和分工，洗脱平衡过程中，要观察数值的变化记录始末过程，观察峰值以便进行洗脱液的收集，此步骤是实验的关键。能否成功将影响后边SDS-PAGE测定CHOM的分子量。

2.8.4用BAEE法测定CHOM的活性，应注意样品的预热以及预热的时间。使用分光光度计应注意分光光度计的调零，以及调零后应重新计时5min。

2.8.5SDS-PAGE电泳时，剥胶时应该注意胶的脱落，防止破碎。

2.8.6由于本实验需要经过蛋白质的粗提，蛋白质的纯化，BAEE法测活性以及SDS-PAGE测定分子量等，综合性较强且时间较长，操作方法复杂，以及使用仪器较多，要做好每次实验前的预习，操作应该谨慎小心。同时本实验需要各组员的相互配合，只有团队的相互合作才能更好的完成实验。

参考文献

[1]蔡祖花;王凤山;张天民; 胰蛋白酶抑制剂的临床研究概况[J]. 中国生化药物杂志.2000,03（10）：35-37. [2]柳武革; 薛庆中; 蛋白酶抑制剂及其在抗虫基因工程中的应用[J]. 生物技术通报.2000,01(3):227-229.

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