医院感染预防与控制标准操作规程(7)

82.生物安全柜标准操作规程

一、适用范围

1.原代细胞培养物操作。

2.细菌涂片、接（转）种培养物。

3.产生气溶胶的操作（如血标本离心后的脱帽等）。 4.挥发性或放射性的有毒物（化学）品操作。 二、安置要求

1.生物安全柜应放在远离活动及可能有干扰气流的地方。

2应尽量在安全柜的后侧及两侧留下30cm的空间，便于维护作业。 3.柜子上方则留下30～35cm的高度。 三、操作步骤

1.开启电源和内外风扇。

2.在机器预热时将所有必需的物品置于安全柜内。 3.准备一块浸有75％乙醇的纱布。

4.开始工作前及完成工作后，让安全柜工作5min来完成“净化”过程。

5.手和双臂伸入生物安全柜中等待大约1min，使安全柜调整完毕才开始进行物品处理。 6接种环应用电子加热器加热灭菌，而不应适用明火。 7.在实验结束时，生物安全柜内所有物品都应清除表面污染。标本和培养基移出安全柜。 8.每天实验结束时，用75％乙醇擦拭台面、四壁及玻璃的内外侧等部位来清除污染。 9.有标本溢出等污染时，用含氯消毒剂等进行消毒，然后用水再次进行擦拭。 四、注意事项

1每次开始实验前将所需物品置于安全柜内，以尽可能减少双臂进出次数。 2.双臂应垂直的缓慢进出前面的开口。 3.尽量减少操作者身后的人员活动。

4. 生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。 5.在生物安全柜内操作时，不能进行文字工作。

6. 生物安全柜前面的进气格栅不能被纸、仪器设备或其他物品阻拦。 7.所有物品应尽可能的放在靠近工作台后缘的位置，但不阻拦后部格栅。 8.可产生气溶胶的设备（如混均器、离心机等）应靠近安全柜的后部位置。 9生物危害性废弃物袋放在安全柜内右侧，袋中放入含氯消毒剂等。

10.房中有人时要关闭紫外线灯，以保护眼睛和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害。 11.安全柜一直维持运行状态（8h工作期间），不得反复开关。

12.当气流警报响起时，应立即停止工作，并报告生物安全负责人。

83.血培养标本采集、运送与报告标准操作规程

一、血培养指征

患者出现寒战，体温超过38摄氏度或低体温，怀疑血流感染时，尤其存在以下情况时，应抽血做细菌和真菌培养：医院内肺炎；留置中心静脉导管超过72h；感染性心内膜炎；骨髓炎；有严重基础疾病、免疫缺陷伴全身感染症状；临床医生怀疑有血流感染可能的其他情况。

二、采血时机

一旦怀疑有血流感染可能，应立即采血做血培养，最好在抗菌治疗前或停用抗菌药物24h后，以寒战、发热时采集为宜。

三、采血流程 （一）消毒

1.培养瓶消毒程序：用消毒液消毒培养瓶橡皮塞，待干燥后使用。

2.皮肤消毒程序：用消毒剂从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达5cm以上，待消毒液挥发干燥后（常需30s以上）穿刺采血。

（二）静脉穿刺和培养瓶接种

成人用注射器无菌穿刺取血后，排今针头内空气，直接注入血培养瓶，勿换针头（如果行第二次穿刺或用头皮针取血时，应换针头），先注于厌氧培养瓶，避免注入空气，然后注入需氧培养瓶，轻轻混匀以防血液凝固。近年来，临床普遍采用负压血培养瓶，将血从患者静脉直接吸入血培养瓶，减少污染环节。

（三）注意事项

1.检验单需注明抗菌药物使用情况，血液采集时间和部位、临床诊断等患者信息。 2.采血部位通常为肘静脉，凝为细菌性心内膜炎时以肘动脉或股动脉采血为宜，切忌在静脉抗菌药物的静脉处采血。除非怀疑有导管相关的血流感染，否则不应从留置静脉或动脉导管取血，因为导管易被皮肤正常菌群污染。

3.采血次数：对于成年患者，应该同时分别在两个部门采集血标本，在两个不同部门分离到同样菌种才能确定是病原菌。

4.细菌性心内膜炎：在24h内取血3次，每次间隔不少于30min；必要时次日再做血培养2次。

5采血量：以培养基与血液之比10：1为宜。以稀释血液中的抗菌药物、抗体等杀菌物质。采血量过少会明显降低阳性率。成人每次每培养瓶采血8～10ml，婴幼儿每次每培养瓶采血2ml 。

四、运送要求

1.所有标本采集后都应立即送往实验室，最好在2h 以内，如果不能及时送检，宜置于室温环境。血培养瓶送到检验科放入培养箱内，不应暂存于冰箱内。

2.送检标本应正确粘贴条形码，注明采样时间和送检时间。

3安全防护：放标本的容器必需防漏，禁止将渗漏的标本送往实验室。 五、报告要求

（一）紧急口头（电话）报告

血培养出现阳性报警时，立即进行革兰氏染色、镜检，并在最短的时间内将结果向临床主管医生进行紧急口头（电话）报告。口头报告包含以下内容，并记录在案。

（1）报告者全名或工号， （2）报告的时间。

（3）所联系医生的全名（或工号）。

（4）报告镜检结果并强调其紧急价值； （5）确认临床医生收到报告并复述结果。 （二）最终结果（书面）报告

（1）无菌生长（培养5天无需氧菌和厌氧菌生长）； （2）阳性培养结果（最终鉴定结果，最终药敏结果）。 （三）其他报告和记录

1.标本被拒收时，需即刻通知临床立即重新采血，并记录在案。

2.最终结果与紧急口头报告结果不符，需要变更时，需立即通知临床，同时必须在书面报告上提供正确的结果，注明变更的内容。

3.其他需临床注意的事项的记录，如：采血量不足，标本转运时间过长、标本采集份数不够等信息。

84.痰标本采集与运送标准操作规程

一、采集目的

一般可用于普通细菌、分枝杆菌、真菌和军团菌的涂片或培养检测，经气管穿刺吸引物可用于厌氧菌的检测。

二、一般原则

1.采集标本的最佳时机应在使用抗菌药物前。 2.以采集清晨第二口痰液。

3.对于普通细菌性肺炎，痰标本每天送检一次，连续2～3天。不建议24h内多次采样送检，除非痰液外观形状出现变化。

4.怀疑分枝杆菌感染者，应连续3天清晨痰液送检。 三、采集方法

（一）自然咳痰法与雾化导痰法 1.用物准备：无菌容器（盒）、生理盐水（250ml或500ml）、化验单。 2.核对患者床号、姓名等。

3.无痰或痰量极少时可用3％～5％氯化钠溶液5ml雾化吸入约5min后留取痰液。 4.如有可能，应在医护人员直视下留取清晨第二口痰液。嘱咐患者留取前摘取牙托，清洁口腔，如刷牙后反复用生理盐水漱口；深吸气后用力自器官深部咳出痰液，置无菌容器内。应尽可能防止唾液及鼻咽部分分泌物混入样品，不应用纸巾包裹痰液。

（二）支气管镜法

笔或口腔插入支气管镜，常用采集方法有经支气管镜吸引、支气管肺部灌洗、防污染毛刷或防污染支气管灌洗等。

（三）经人工气道吸引法

1.用物准备：负压吸引器、生理盐水、一次性吸痰管、无菌手套、无菌容器（试管）化验单。

2.核对患者床号、姓名等。 3.将患者头部装箱操作者一侧。

4.进行手卫生后将一次性吸痰管末端拆开，连接吸引器，调节吸引器至适宜负压（成人：40.0～55.3kpa小儿：<40.0kpa）.

5.将一次性吸痰管外包装去除，戴手套持吸痰管试吸生理盐水，检查管道是否通畅。 6.折叠一次性吸痰管末端，插入口腔或人工气道至适宜深度，放开吸痰管末端，轻柔、灵活、迅速地左右旋转上提吸痰管吸痰。见吸痰管内有痰液吸出即折叠一次性吸痰管退出，将一次性吸痰管与吸引器分离（使用人工呼吸机者，一次吸痰时间不超过15s，吸痰前后需吸入高浓度氧气1～2min）.

7.将痰液注入无菌容器（试管）内，如痰液黏稠可用一次性针筒向吸痰管注入少量生理盐水，将痰液冲入无菌容器（试管）内。

四、运送与保存

应在2h内送至实验室，否者应4摄氏度冷藏，但放置时间不可超过24h。

85.手术部位感染标本采集及运送标准操作规程

一、一般原则

1.在抗菌药使用前，且仅有在临床感染症状或伤口恶化或长期不能愈合时采集标本。 2.皮肤或黏膜表面的清洁。

（1）闭合伤口和穿刺物标本：消毒方法同血培养标本的皮肤消毒（见《血培养标本采集、运送与报告标准操作规程》）。

（2）开放伤口：无菌生理盐水充分冲洗伤口部位。不可以用消毒剂。 3.采集新鲜的感染组织，避免采集浅表的组织碎屑。 4.若可以采集穿刺物或活检标本，应避免拭子标本。 二、容器

1.较大的标本：含有少量生理盐水的带螺纹口的无菌塑料容器。

2。标本较大或拭子标本：MW&E TRANSEAB运输培养基，适用于需氧和厌氧菌。 三、采集方法 （一）封闭性脓肿

1.注射器穿刺抽取脓液。

2.若无法抽取到脓液，应先皮下注射少量无菌生理盐水，再次穿刺抽取脓液；若脓液过多，应先切开引流，在基底部或脓肿壁采集样本。脓液的量以大于1ml为宜。

3.排除注射器内部及针头的气体，用无菌橡皮塞封闭针头送检；或直接打入血培养瓶中。疑为厌氧菌，应迅速将脓液打入厌氧菌培养瓶中。

（二）组织和活检标本

1.采集足够大的组织，体积以1立方毫米为宜，避免在坏死区域采集。 2.将小块的组织放在运输培养基内；较大的放在无菌容器中，并加入少量无菌生理盐水。 （三）开放伤口

1.无菌生理盐水彻底冲洗浅表部位，去除表面的渗出物和碎屑。

2.用拭子深入伤口的基底部或伤口－正常组织边缘部采集两个标本，分别用于培养和革兰氏染色。

四、标本的标识

填上患者信息。标本类型（深部组织、表浅组织、脓肿和穿刺物等）、标本的来源（腹腔、腿和上臂等），记录标本采集的日期和时间及是否在使用抗菌药物前采集，选择检查项目（需氧培养或厌氧培养。）。

五、标本的送检

为了更好地分离病原菌，标本应在采集后的30min内送到实验室。送检时间应保持标本的湿润（尽量采取运输培养基，组织可以放在生理盐水中）。在送检前或运送过程中，禁止将标本放在冰箱。若不能及时送检，运输培养基中标本应室温保存，但最长不可超过24h.

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