营养饲料分析实验指导(4)

一、原理

用强酸将试样中的有机物破坏，使磷游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的磷钼黄(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3，在波长420nm下进行比色测定。

此法测得为总磷含量，其中包括动物难于吸收的植酸磷。 二、适用范围

本方法适用于各种混合饲料（配合饲料、浓缩饲料及预混合饲料等）和单一饲料。 三、仪器设备

1. 实验室用样品粉碎机或研钵。 2. 分样筛，孔径0.45mm（40目）。 3. 分析天平，感量0.0001g。

4. 高温电炉，可控温度在550±20℃。 5. 瓷坩埚，Φ30mm。

6. 容量瓶，50ml、100ml和1000ml。 7. 刻度移液管，10ml。 8. 凯氏烧瓶，250ml或500ml。 四、试剂

1. 盐酸（GB 622-89），分析纯，1:1水溶液。 2. 硝酸（GB 626-89），分析纯。 3. 钒钼酸铵显色剂

称取偏钒酸铵（HG 3-941-76，分析纯）1.25g，加硝酸250ml。

另取钼酸铵（GB 657-93，分析纯）25g，加蒸馏水400ml加热溶解之。冷却后将此溶液倒入偏钒酸铵的硝酸溶液中，并加蒸馏水至1000ml，摇匀，避光保存。如生成沉淀则不能使用。

4. 磷标准溶液

将磷酸二氢钾（GB 1274-93，分析纯）在105±2℃烘干2h后在干燥器中冷却，准确称取0.2195g，溶解于蒸馏水并全部转移至1000ml容量瓶中，再加硝酸3ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为50μg/ml磷标准溶液。

五、试样的选取与制备

取具有代表性试样，粉碎至40目，用四分法缩减至200g，装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。

六、测定步骤 1. 试样分解液的制备

同“第七节 饲料中钙含量的测定”。 2. 标准曲线的绘制

准确移取磷标准溶液0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0和15.0ml于50ml容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色剂10ml。用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min以上充分显色。以0ml溶液为参比，用10mm比色杯在420nm波长下，用分光光度计测各溶液的吸光度。

以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线（亦可回归出公式用于计算）。

3. 试样的测定

准确移取试样分解液1ml（含磷量50～500μg）于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min以上充分显色。以0ml溶液为参比，用10mm比色杯在420nm波长下，测定吸光度。用标准曲线查得试样分解液的含磷量。

七、结果计算 1. 计算公式

P（%）?XW?V100?100106?XW?V?100

式中，W—试样重（g）；

V—比色测定时所移取试样分解液的体积（ml）；

X—由标准曲线或回归公式算得试样分解液的含磷量（μg）。 2. 重复性

每个试样至少取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

含磷量≥0.5%时，允许相对偏差为3%；含磷量＜0.5%时，允许相对偏差为10%。 八、注意事项

1. 配制钒钼酸铵显色剂时，偏钒酸铵和钼酸铵皆不易溶。 2. 钒钼酸铵显色剂用完需再配制时，标准曲线应重新绘制。 九、其他

除本法外，还有氮磷钙测定仪可对饲料中总磷含量进行快速测定。

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