营养饲料分析实验指导(3)

图2-1 Van Soest 分析法示意图

二、适用范围

本方法适用于各种植物性饲料。 三、仪器设备

1. 分析天平，感量0.0001g。

2. 电热式恒温干燥箱（烘箱），可控温度在105±2℃。 3. 高温电炉，可控温度在550±20℃。 4. 六联调温电炉。

5. 冷凝器或冷凝装置，2套。 6. 高型烧杯，600ml。 7. 抽滤瓶，500ml，2个。 8. 真空泵。

9. 干燥器，用变色硅胶或氯化钙作干燥剂。 10. 玻璃坩埚，40ml，2个。 11. 坩埚钳，长柄、短柄。 12. 表面皿。 13. 烧杯，500ml。 14. 容量瓶，1000ml。 15. 量筒，100ml。 16. 滴管。 17. 洗瓶，500ml。 18. 长玻棒，胶头。

19. 橡皮管，壁厚0.5～0.7cm。 20. 药勺。 四、试剂

1. 中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）。

准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14N2O8Na2·2H2O，化学纯）和6.8g硼砂（Na2B4O7·10H2O，GB 632-78，分析纯）一同放入1000ml刻度烧杯中，加入少量蒸

馏水，加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，化学纯）和10ml乙二醇乙醚（C4H10O2，化学纯）；称取4.56g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，化学纯）置于另一烧杯中，加少量蒸馏水微微加热溶解后，倾入第一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，此溶液pH在6.9～7.1（pH一般不需要调整）。

2. 1.00mol/L硫酸。取约27.87ml浓硫酸（H2SO4，化学纯，96%，比重1.84）慢慢加入已装有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后注入1000ml容量瓶内定容。（如需标定，以1.6g基

准无水碳酸钠参见第二章第四节HCl标定方法进行）。

3. 酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）

称取20g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，化学纯）溶于1000ml 1.00mol/L硫酸溶液中，搅拌溶解，必要时过滤。

4. 无水亚硫酸钠，Na2SO3，化学纯。 5. 丙酮，CH3COCH3，化学纯。 6. 十氢化萘，C10H18，化学纯。 五、测定方法

1. 称取1g左右样品（磨碎并通过1mm筛孔）置于高型烧杯中，加入中性或酸性洗涤剂100ml，在高型烧杯上装置球形冷凝管。

2. 将高型烧杯置于调温电炉上加热，要求在5～10min内煮沸，回流1h（调节电炉温度，使溶液保持在微沸状态，防止泡沫上升），注意经常摇动烧杯，使烧杯内样品与溶液充分混合和接触。

3. 回流结束后，取下高型烧杯，将烧杯中溶液缓慢倒入铺有干燥并称重后的定量滤纸的漏斗上，以抽滤装置抽滤，注意调节抽气速度，防止滤纸破裂。

4. 关闭抽滤装置，将高型烧杯中的样品残渣全部倒在滤纸上，并用热蒸馏水（＞90℃）冲洗残渣至中性为止（可用蓝色石蕊试纸检查）。

5. 用丙酮冲洗残渣至流下的丙酮液呈无色为止。

6. 将残渣用滤纸包好，置于105±2℃烘箱内烘24h，取出置于干燥器中冷却，称至恒重。

六、结果计算 1. 计算公式

中性（或酸性）洗涤纤维（%）?滤纸和样品残渣重（g）?滤纸烘干后重（样品重（g）g）?100

2. 重复性

每个试样至少应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

中（酸）性洗涤纤维含量≥10%时，允许相对偏差为4%；中（酸）性洗涤纤维含量＜10%时，允许相差（绝对值）为0.4。

实验六 饲料中无氮浸出物的计算

一、原理

饲料中无氮浸出物主要包括淀粉和糖，以及一些半纤维素、木质素、有机酸等。因这些成分十分复杂，无法一一测定，故一般采用的饲料分析方案中，无氮浸出物（NFE）是根据间接计算法求得。即在100中减去水分、粗灰分、粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维等的百分数，所得之差即为无氮浸出物的百分含量。由于不进行直接测定，其它养分的测值准确与否都会影响无氮浸出物的结果，因而只能概括说明饲料中这一部分养分的含量。

二、计算公式

无氮浸出物（%）?100??水分(%)?粗灰分(%)?粗蛋白质(%)?粗脂肪(%)?粗纤维(%)?

?干物质(%)??粗灰分(%)?粗蛋白质(%)?粗脂肪(%)?粗纤维(%)?

实验七 饲料中钙含量的测定（滴定法）

一、原理

用强酸将试样中的有机物破坏，钙变成溶于水的离子，用过量草酸铵使Ca2+全部生成草酸钙沉淀，再以氨水洗去游离的草酸根，最后用高锰酸钾滴定与钙结合的草酸根间接测定钙的含量。

主要化学反应如下：

CaCOCa2?3?2H???????Ca3Cl、NO??2??CO2??H2O?C2O4?42????CaC2O4?2??2NH?C2O4????NH4?2C2O44

CaC2O4?H2SO2MnO?44???CaSO?H2C2O4???10CO?2?5H2C2O4?3H2SO4??2MnSO4?SO2?4?8H2O二、适用范围

本方法适用于各种混合饲料（配合饲料、浓缩饲料及预混合饲料等）和单一饲料。 三、仪器设备

1. 实验室用样品粉碎机或研钵。 2. 分样筛，孔径0.45mm（40目）。 3. 分析天平，感量0.0001g。

4. 高温电炉，可控温度在550±20℃。 5. 瓷坩埚，Φ30mm。 6. 容量瓶，100ml。

7. 滴定管，酸式，25或50ml。 8. 玻璃漏斗，Φ6cm。

9. 定量滤纸，中速，Φ7～9cm。 10. 移液管，10ml和20ml。 11. 锥形瓶（或烧杯），250ml。 12. 凯氏烧瓶，250或500ml。 四、试剂

1. 盐酸（GB 622-89），分析纯，1:1水溶液。 2. 硝酸（GB 626-89），分析纯。

3. 硫酸（GB 625-89），分析纯，1:3水溶液。

4. 氨水（GB 631-77），分析纯，1:1水溶液和1:50水溶液。 5. 草酸铵（HG 3-976-81），分析纯，4.2%水溶液。

6. 甲基红指示剂，甲基红（HG 3-958-76），分析纯，0.1g溶于100ml 95%乙醇中。 7. 0.05mol/L高锰酸钾标准溶液 1）配制

称取高锰酸钾（GB 643-88，分析纯）约1.6g，溶于1000ml蒸馏水中，煮沸10min，冷却静置1～2天，过滤保存于棕色瓶中。

2）标定

称取草酸钠基准物（GB 1289-77，105±2℃烘干2h，存于干燥器中）0.1g，准确至0.0001g，溶于50ml水中，再加1:3硫酸溶液10ml，将此溶液加热至75℃～85℃，用配制的高锰酸钾标准溶液滴定。溶液呈现粉红色且1min内不褪色为终点。要求滴定结束时，溶液温度在60℃以上。同时做试剂空白试验。

高锰酸钾标准溶液浓度（C）计算公式如下：

m（C）mol/L?（V?V0）?0.0670

式中，m—基准草酸钠（Na2C2O4）的克数（g）；

0.0670—1ml高锰酸钾标准溶液相当于基准草酸钠的克数； V—滴定时消耗高锰酸钾标准溶液的体积（ml）；

V0—试剂空白试验时消耗高锰酸钾标准溶液的体积（ml）。

每次标定至少取3份平行样进行操作，计算结果的相对偏差不得超过0.2%，否则需重新标定，以其算术平均值作为标定结果。

8. 高氯酸（GB 623-77），分析纯。 五、试样的选取与制备

取具有代表性试样，粉碎至40目，用四分法缩减至200g，装于密封容器中，防止试样

成分的变化或变质。

六、测定步骤 1. 试样分解液的制备 （1）干法

称取试样2g左右于坩埚中，准确至0.0001g，在高温电炉中300℃小心炭化20min，再升高温度在550±20℃下灼烧3h（或测定粗灰分后继续进行）。在盛灰坩埚中加入1:1盐酸溶液10ml和浓硝酸5～6滴，搅拌溶解10min，转入100ml容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。

（2）湿法（用于无机物或液体饲料）

称取试样2～5g于凯氏烧瓶中，准确至0.0001g。加入硝酸30ml，加热煮沸，至二氧化氮黄烟逸尽，冷却后加入70%～72%高氯酸10ml，小心煮沸至溶液无色，不得蒸干（否则易爆炸！危险！！）。冷却后加蒸馏水50ml，并煮沸驱除二氧化氮，冷却后转入100ml容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。

2. 钙沉淀的生成

准确移取10～20ml试样分解液于锥形瓶中，加蒸馏水100ml和甲基红指示剂2滴，并滴加1:1氨水溶液使变橙色，再逐滴加1:1盐酸溶液使刚好变红（此时pH为2.5～3.0），小心煮沸，趁热加入草酸铵溶液10ml，并不断搅拌，若溶液变橙色，则滴加盐酸使再变红色。放置过夜使草酸钙沉淀陈化。

3. 钙沉淀的洗涤

将钙沉淀用定量滤纸过滤，并用1:50氨水溶液洗沉淀6～8次（氨水量应浸没沉淀并全部滤净为洗涤1次），使无游离草酸根离子（接滤液数ml，加硫酸溶液数滴，加热至80℃，再加高锰酸钾溶液1滴，呈微红色且半分钟不褪色，则证明无草酸根离子）。

4. 高锰酸钾滴定

将沉淀和滤纸转入原锥形瓶，加1:3硫酸溶液10ml，蒸馏水50ml，加热至75℃～85℃，用0.05mol/L高锰酸钾标准溶液滴定，溶液呈粉红色且半分钟不褪色为终点。

同时进行空白溶液测定。 七、结果计算 1. 计算公式

40（V?V0）?C??C?2002?100?（V?V0）Ca（%）?V'1000W?V'W?100

式中，V—试样测定时0.05mol/L高锰酸钾标准溶液滴定用体积（ml）；

V0—空白测定时0.05mol/L高锰酸钾标准溶液滴定用体积（ml）； C—高锰酸钾标准溶液浓度（mol/L）； W—试样重（g）；

V'—移取试样分解液体积（ml）； 40/2—钙的mol数。

2. 重复性

每个试样至少取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

含钙量在1%以下时，允许相对偏差10%；含钙量在1%～5%时，允许相对偏差5%；含钙量在5%以上时，允许相对偏差3%。

八、注意事项

1. 高锰酸钾标准溶液浓度不稳定，应至少每月标定一次。

2. 每种滤纸的空白值不同，消耗高锰酸钾溶液体积也不一样，因此，至少每盒滤纸应做一次空白溶液测定。

九、其他

除本法外，还有氮磷钙测定仪可对饲料中钙含量进行快速测定。

实验八 饲料中总磷含量的测定（比色法）

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