DRR041A(SYBR)TAKARA说明书(13)

●引物设计服务说明：本公司提供用于基因表达定量分析的引物设计及合成服务

本公司以美国NCBI Data Base上登录的Human、Mouse、Rat、Cow、Dog、Chicken的RefSeq为对象，已经设计完成了各基因用于定量表达分析的Real Time RT-PCR用高特异性Primer Set，此Primer Set最适于本制品使用，可省略PCR反应条件优化实验。具体情况如下：

可提供1～3对合适的引物，由客户自己选择。 1. 从3’端开始的1,500 Base内的引物候补序列。 2. 从5’端开始的1,500 Base内的引物候补序列。 3. 针对Target基因全长的引物候补序列。

●问 答

Q1. SYBR Premix Ex Taq为什么要于4℃保存？ A1.

经本公司实验证明，-20℃反复冻融制品性能可能下降。因此，我们推荐本制品于4℃避光保存，避免-20℃保存。

A2.

Q2. 使用SYBR Premix Ex Taq时，是否要对Mg2+浓度进行研讨？

使用SYBR Premix Ex Taq时，不需要对Mg2+浓度进行研讨。实验时首先请使用本公司说明书推荐的PCR反应条件，如果得不到良好实验结果时请研讨PCR反应条件，改变使用的PCR引物等。

A3.

Q3. SYBR Premix Ex Taq的PCR扩增对使用引物有何要求？

PCR用制品的DNA扩增性能与引物种类有一定的内在关系，本公司提拱SYBR Green I嵌合荧光法的PCR或RT-PCR用引物的免费设计服务，详细情况请参见本说明书的「引物设计说明」部分。使用TaKaRa设计推荐的引物，将更适合于SYBR Premix Ex Taq的Real Time PCR扩增。

Q4. 使用ABI PRISM仪器时，是否需要进行了95℃ 10分钟的变性步骤？ A4.

本制品不需要使用这一长时间的变性步骤，请遵照本公司说明书的实验条件要求进行PCR反应。

Q5. 使用ABI PRISM仪器时实验结果不好，融解曲线无主峰，为什么？ A5.

SYBR Premix Ex Taq中不含有ROX Reference Dye，在制品包装中另外附有。进行Real Time PCR反应时需在反应体系中添加ROX Reference Dye，在反应体系中不添加ROX Reference Dye时，融解曲线图将会产生无主峰的一条紊乱的波浪线。

A6.

Q6. 和某些公司制品相比，SYBR Premix Ex Taq制品的颜色较淡，为什么？

有些公司的Premix制品中已经加有ROX Reference Dye，所以颜色较深。而SYBR Premix Ex Taq在制品中没有添加ROX Reference Dye，但在制品包装中另外附有，所以SYBR Premix Ex Taq颜色较淡。

注）本公司只对在本公司合成的引物/探针提供免费设计服务，恕不受理不在本公司合成的 引物/探针的设计委托！

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