细胞生物学(翟中和)笔记(10)

细胞生物学(翟中和)笔记

?电子“探针”扫描，激发样品表面放出二次电子，探测器收集二次电子成象。

? CO 2临界点干燥法防止引起样品变形的表面张

力问题

一、 离心分离技术

?用途：于分离细胞器与生物大分子及其复合物

?差速离心：分离密度不同的细胞组分

?密度梯度离心：精细组分或生物大分子的分离

二、 细胞内核酸、蛋白质、

酶、糖与脂类等的显示方法

?原理：利用一些显色剂与所检测物质中一些

特殊基团特异性结合的特征，通过显

色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来

判断某种物质在细胞中的分布和含量。

Feulgen Staining

三、特异蛋白抗原的定位与定性

?免疫酶标技术

?免疫胶体金?免疫荧光技术：

快速、灵敏、有特异性，但其分辨率有限 （图）

?蛋白电泳(SDS-PAGE)

与免疫印迹反应(Western-Blot)

?免疫电镜技术：

?免疫铁蛋白技术

技术

应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分泌动态；胞内酶的研究；膜蛋白的定位与骨架蛋白的定位等

四、细胞内特异核酸的定位与定性

?光镜水平的原位杂交技术

（同位素标记或荧光素标记的探针）

?电镜水平的原位杂交技术

（生物素标记的探针与抗生物素抗体相连的胶体金标记结合）

?PCR技术

五、放射自显影技术

?原理及应用：

?利用同位素的放射自显影，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究；

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