生物下游技术试题(8)

防止污染应根据产生的原因不同，使用不同的方法。

（1）预处理法（2）开发抗污染的膜（3）加大供给液的流速

3.简述蛋白质复性的主要步骤和复性方法。

1.稀释复性与透析复性 2.色谱复性 3.凝胶过滤复性 4.金属螯合色谱复性 5.亲和色谱复性 6.其他吸附色谱复性

4. 色谱装置主要包括哪几部分及它们的作用。

由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统等四大部分组成。

一、高压输液系统

高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表等组成。

1.溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成，容量为1-2 L，用来贮存足够数量、符合要求的流动相。

2.高压输液泵 其功能是将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。由于液相色谱仪所用色谱柱径较细，所填固定相粒度很小，因此，对流动相的阻力较大，为了使流动相能较快地流过.

3. 梯度洗脱装置 梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。

二、进样系统

进样系统包括进样口、注射器和进样阀等，它的作用是把分析试样有效地送入色谱柱上进行分离。

三、分离系统

分离系统包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。主要作用是分离样品的。

四、检测器

检测器是液相色谱仪的关键部件之一。对检测器的要求是：灵敏度高，重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感等。

5. 比较凝胶过滤层析和SDS－PAGE电泳测定蛋白质分子量的异同。

凝胶过滤层析是常用的测定生物分子相对分子质量的方法。凝胶过滤法测定分子量的基础是公式Kav= a－b logMr，对于特定的凝胶柱，由于外水体积和柱体积是恒定不变的，根据公式可知， Kav =（Ve－V0）/（Vt－V0）在一定分子量范围内，洗脱体积Ve与logMr之间也存在线性关系。利用上述线性关系，人们通过将几种已知分子量的物质加样至层析柱，分别测出洗脱体积Ve，同时计算出这些分子相应的logMr值，并以Ve对logMr作图，即得到该层析柱的分子量标准曲线。然后在相同的条件下对需要测定分子量的物质进行层析，测出其Ve值，根据标准曲线即可求出该物质的分子量。

SDS－PAGE电泳测定蛋白质分子量是根据迁移率与分子量的对数呈线性关系即logMW=logK-bm=K-bm。利用上述线性关系，人们通过将几种已知分子量的物质加样至电泳槽，分别测出迁移率，同时计算出这些分子相应的logMr值，并以迁移率对logMr作图，即得到该电泳的分子量标准曲线。然后在相同的条件下对需要测定分子量的物质进行电泳，测出其迁移率值，根据标准曲线即可求出该物质的分子量。

四. 论述题（每小题15分，共15分）

请根据生物工程下游技术的一般工艺过程设计一套经济的且技术可行的黑曲霉产酶的提取纯化及其分子量测定方案。

生物工程下游技术一般处理步骤：

发酵液 处理对象：黑曲霉代谢产物-酶

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