生物下游技术试题(14)

①SDS-PAGE

SDS是一种阴离子去污剂，作为变性剂和助溶性试剂，能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白质分子的二级、三级结构；而强还原剂，如二硫苏糖醇、β-巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后，蛋白质分子被解聚为组成它们的多肽链，解聚后的氨基酸侧链与SDS结合后，形成带负电的蛋白质-SDS胶束，所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量，消除了不同分子间的电荷差异；同时，蛋白质-SDS聚合体的形状也基本相同，这就消除了在电泳过程中分子形状对迁移率的影响。因此，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量，而与所带电荷和形状无关。 在一定分子量范围内， logMW=logK-bm=K-bm迁移率与logMr之间也存在线性关系。利用上述线性关系，人们通过将几种已知分子量的物质电泳，分别测出迁移率，同时计算出这些分子相应的logMr值，并以迁移率对logMr作图，即得到该电泳的分子量标准曲线。然后在相同的条件下对需要测定分子量的物质进行电泳，测出其迁移率，根据标准曲线即可求出该物质的分子量。 5分 ②凝胶过滤法

凝胶过滤法测定分子量的基础是公式Kav= a－b logMr，对于特定的凝胶柱，由于外水体积和柱体积是恒定不变的，根据公式可知， Kav =（Ve－V0）/（Vt－V0）在一定分子量范围内，洗脱体积Ve与logMr之间也存在线性关系。利用上述线性关系，人们通过将几种已知分子量的物质加样至层析柱，分别测出洗脱体积Ve，同时计算出这些分子相应的logMr值，并以Ve对logMr作图，即得到该层析柱的分子量标准曲线。然后在相同的条件下对需要测定分子量的物质进行层析，测出其Ve值，根据标准曲线即可求出该物质的分子量。 5分

2．论述在设计下游分离过程中，必须考虑哪些问题方能确保我们所设计的工艺过程最为经济、可靠？ 生物工程下游技术一般处理步骤： 品制作 2分

首先要了解提取对象和杂质的理化性质,生物学性质；明确目的物要达什么样的纯度和收率来设计工艺过 程。 2分 ①控制好下游技术提取步骤

生化分离技术的步骤越多，提取收得率也越低． 1分 ②对于原料来说

来源丰富,含量相对较高,杂质尽可能少. 1分 明确整个阶段的任务

初始阶段: 主要任务在于从相对较大体积的抽提液中除去大量杂质,同时能浓缩样品和保障样品处于稳定的环境中.常用的方法有哪些了啊。 1分

中间阶段: 主要任务是进一步除去大量杂质,但这些杂质与目的物的性质差异相对较小,所以选择分离方法要有较高的分辨率. 常用的方法有哪些了啊。 1分 精制阶段: 主要任务是除去微量杂质,使最后的产品获得高纯度. 常用的方法有哪些了啊。 1分 总之产品的收得率和质量控制应是贯穿生物工程下游技术工艺过程的主线. 1分

河南城建学院2011—2012学年第二学期期末考试

《生物工业下游技术》试题（B卷）参考答案及评分标准

一、判断并改错（每小题2分，共20分）

1. 作为动物细胞培养的优良微载体应该是刚性的。（ × ）

改：作为动物细胞培养的优良微载体应该是非刚性的。

2. 微波加热法破碎细胞特别适合于对热不稳定的的产物的提取。（× ）

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